化学发光免疫测定、酶联免疫、时间分辨免疫荧光三种方法检测乙肝VIP免费

第1页共6页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共6页时间分辨免疫荧光与化学发光法、酶联免疫法测定乙肝标志物的比较摘要目的:比较化学发光免疫测定（CL）、酶联免疫（EIA）与时间分辨免疫荧光（TRFIA）三种方法检测乙肝病毒免疫标志物的优缺点。方法:用上述三种方法的检测试剂及仪器对189例临床血清标本分别进行检测，然后进行结果分析。结果:三者对乙肝表面抗原的检测灵敏度均达到了0.1ng/ml。对HBcAb的测定，以CL的灵敏度最高，ELISA最低。对表面抗体、E抗原及E抗体的检测，相互符合率均在95%以上，但对核心抗体的检测符合率，TRFIA与CL为83.23%，TRFIA与EIA为85.19%。结论:三种方法的检测性能相差不大，但操作性各有特点，应按各实验室具体情况加以选择。关键词：化学发光法，酶联免疫试验，时间分辨荧光免疫测定本文作者:肖征周薇薇白立彦赵莉萍Comparisonofchemiluminescence,ELISAandtime-resolvedfluoroimmunoassayindetectingHepatitisBmarkers肖征，副主任医师，副教授周薇薇，主管技师白立彦，主管技师赵莉萍，主管技师解放军总医院微生物科，100853北京ZhengXiao,WeiweiZhou,LiyanBai,LipingZhaoGeneralHospitalofPLA,Beijing,100853PRCAbstractSubject:TocomparethreedeferentassaystoseetheirabilitiesindetectinghepatitisBmarkers.Methods：ByusingChemiluminescence(CL),ELISAandTime-resolvedfluoroimmunoassay(TRFIA),189serumsamplesweretestedforhepatitisBmarkers,thentheresultswereanalyzed.Results:Thethreeassaysallcandetectaslowas0.1ng/mlofHBsAg.ButinHBcAb,TheCLshowedthehighestsensitivity,ELISAshowedthelowestsensitivity.The第2页共6页第1页共6页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共6页coincidencesofthethreemethodsindetectingHBsAb,HBeAg,andHBeAbarenormallyabove95%,butforHBcAb,thecoincidencewas83.23%betweenTRIFandCL,and85.19%betweenTRIFAandEIA.Conclusion:TherewerenotmuchdifferenceamongthesethreemethodsregardingtheirabilitiesindetectinghepatitisBmarkers,butthemaneuverflexibilitiesofeachmethoddifferedalot.Oneshouldconsiderhisownlab'ssituationbeforemakingchoice.Keywords:chemiluminescence,ELISA,time-resolvedfluoroimmunoassay自二十世纪七十年代以来，许多高灵敏度的测定方法应用于临床免疫学检测。其中，酶联免疫法应用最广。近年来发展起来的CL与TRFIA测定据称是灵敏度非常高的方法[1,2,3]。本文就这三种方法对乙肝免疫标志物的测定作一比较，以下结果供大家参考。材料与方法1.试剂与器材：时间分辨免疫荧光测定为上海新波生物公司生产的乙肝两对半测定试剂盒，及由该公司提供的洗板机、孵育器和时间分辨免疫荧光测定仪以及分析判定结果软件系统。酶联免疫方法试剂为SORIN公司（HBsAg）、科华公司（HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）产品；仪器有洗板机（WELLWASH4）、酶标比色仪（READER230S），部分试验在FAME（全自动开放式酶免分析仪）上进行。化学发光法为强生公司VitrosEci化学发光免疫测定系统及配套的专门试剂盒。标本为临床检测乙肝标志物的血液标本，分离血清，-20℃保存备用。HBsAg标准品购自北京市临床检验中心（2ng/ml）,使用时稀释至所需浓度。2.方法ELISA按产品说明书进行。主要步骤有：加样、孵育、洗板、加酶或底物、显色、比色。其中HBcAb测定的样本经1：30稀释。CL法为全自动系统，设计好标本位置、检测项目，按开始键即可TRFIA测试步骤与ELISA法相似，HBcAb测定样本亦经1：30稀释，在最后一步比色为使用时间分辨免疫荧光测定仪测定发光度。变异系数(CV):取0.5ng/mlHBsAg一次做20个测试孔，以测得值（ELISA为OD值，CL为相对荧光强度，TRFIA为定量值）计算批内差异。统计5个批次测定的结果计算批间差异。第3页共6页第2页共6页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共6页3.结果判断ELISA法以标本OD值与临界OD值的比值(S/CO)大于1为阳性,核心抗体测定则相反，以小于0.5为阳性。CL法以标本荧光...