《生物技术大实验》实验指导书VIP专享VIP免费

《生物技术大实验》实验指导书第1页共67页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共67页前言《生物技术大实验》是为生物技术专业本科高年级学生开设的综合实验课程，是在普通生物学实验、生物化学实验、微生物实验、细胞生物学和遗传学实验的基础上的综合实验课程。该实验课程偏重于分子生物学实验教学，通过此实验课程，学生不仅学习到最基本的分子生物学技术，而且学习到前沿的生物技术。分子生物学实验技术突飞猛进，日新月异。分子生物学技术的广泛应用，在20世纪下半叶对生命科学的进步产生了举世公认的巨大推动作用，而且对人们的生活和整个社会的发展亦产生了巨大的冲击和影响。分子生物学技术已广泛渗透和应用到生物学、遗传学、细胞学、微生物学、进化学、肿瘤学、免疫学、药理学、发育学、病毒学、神经生物学、生药学、法医学等与基础医学和临床医学有关的研究领域。21世纪将更是分子生物学技术快速发展的时期，由此引起的生物技术革命并将更加深刻地影响社会的发展。学生基本技能和动手能力的培养都离不开实验室，离不开实验课上的训练，很多理论上的原理都需要到实验课上去验证，很多理论上的知识都需要到实验课上去实践。而实验课教材或实验指导书是开好实验课的基本条件之一。虽然目前的分子生物学实验教材版本众多，但针对本科生的生物技术大实验教材尚无出版。为了加强本学科的教材建设，促进本学科实验课的开设，我们参考了国内外最新的有关分子生物学实验技术的专著，根据我校学生的特点及我们自己现有的基础和条件，特选择了部分实验内容，并结合我们的经验与体会，汇编成了生物技术大实验实验指导书，以供参考。在使用过程中，可根据不同的层次适当增减。同时，对于新近产生和应用前景广阔的生物芯片技术、RNAi技术和蛋白质组研究等，限于我们目前的条件，只能作些演示或作为动态给以介绍，条件一经成熟，即行开设。由于分子生物学技术和生物技术的快速发展，加之我们是第一次这样系统地给学生开设生物技术大试验课程，许多工作还处于不断探索的过程中，难免有不妥和疏漏之处，恳切期望读者提出宝贵意见，以利不断修正完善。编者第2页共67页第1页共67页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共67页目录实验一质粒的提取和纯化…………………………………………….3实验二质粒DNA的电泳和纯度检测…………….……………………..6实验三PCR产物的TA克隆……………………………………………...9实验四感受态大肠杆菌细胞的制备…………………………………...12实验五重组DNA转化大肠杆菌…………………………………........12实验六PCR扩增基因特异片段………………………………………..15实验七DNA片段的回收及纯化………………………………………..19实验八PCR法快速鉴定重组载体……………………………………...22实验九限制性内切酶酶切法鉴定重组质粒…………………………...24实验十外源基因在大肠杆菌中的表达及其检测……………………….28实验十一RNA的提取及其纯度检测……………………………………32实验十二逆转录PCR（RT-PCR）扩增基因特异片段…………………..35实验十三DNA探针制备……………………………………………..…38实验十四Southern印迹杂交……………………………………………41实验十五Northern印迹杂交……………………………………………44实验十六荧光原位杂交（FISH）技术…………………………………第3页共67页第2页共67页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共67页47实验十七外源基因在哺乳细胞中的表达及其检测…………………...50实验十八生物芯片技术………………………………………………...53实验十九RNAi技术……………………………………………………56实验二十蛋白质组技术………………………………………………...58附录基因工程基本技术路线…………………………………………….60实验一质粒的提取和纯化实验目的：了解碱裂解法制备质粒的原理，掌握质粒的小量制备方法。实验原理：质粒DNA的抽提是基因工程操作中最常用与最...