第1页共8页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共8页颁发部门微生物限度检查操作规程接收部门生效日期操作标准---质量制定人制定日期文件编号审核人审核日期文件页数共6页批准人批准日期分发部门1目的建立微生物限度检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。2范围适用于本厂质监科化验室对本厂生产的固体制剂及物料进行微生物限度的检查。3责任化验员有责任按照本操作规程进行检验、判定,并对检验结果负责。4定义微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。5内容5.1总则：5.1.1供试品应随机抽样。一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。5.1.2供试品在检查前不得开启，检查全过程均应严格遵守无菌操作规程，严防再污染。5.1.3控制菌的污染检查应做相应的已知菌对照试验，对照菌株为大肠杆菌[CMCC（B）44102]，每批试验已知菌加入量为50-100个。5.1.4染菌量的检查或控制菌的检查均应做空白对照试验。5.1.5供试品稀释成稀释液后应在均匀状态下取样，凡有抑菌成份或防腐剂的供试品应做特殊处理后进行检验。5.1.6供试品稀释后应在1小时内操作完毕。第2页/共6页第2页共8页第1页共8页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共8页5.1.7除另有规定外，细菌培养温度为30-35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25-28℃，控制菌培养温度为36℃±1℃。5.1.8细菌、霉菌检验结果的报告以1g、1ml或10cm2为单位；控制菌检验报告以每1g、每1ml或每10cm2为单位报告“检出”或“未检出”。5.2仪器、用具恒温培养箱、隔水式生化培养箱、电子天平，移液管(1ml、10ml)、试管、离心管、双碟、镊子、剪刀、不锈钢吸管筒、酒精灯、取样勺、称量纸、研钵一个、不锈钢双碟筒。5.2.1用具的包扎移液管：用纱布包住移液管，然后放入不锈钢灭菌筒内。试管、双碟：试管在管口塞上纱布棉塞、双碟放入不锈钢双碟筒内。无菌衣、裤、帽、口罩：用布口袋将洗净的衣裤、帽子、口罩配套后装入，扎紧袋口，再用牛皮纸包好。5.2.2用具的灭菌将包扎好的用具，在121±0.5℃蒸汽灭菌柜中灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却灭菌物品内蒸汽凝造成负压，易致染菌，应置烘箱烘干。5.3培养基、试剂5.3.1营养琼脂培养基称取本品36克，加1升蒸馏水，加热溶解后，按需要进行分装，经12115℃分钟灭菌备用。5.3.2虎红培养基称本品30克，加1升蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌11620℃分钟。5.3.3胆盐乳糖培养菌（BL）称本品36克，加1升蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌11620℃分钟。5.3.4曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）称本品42克，加1升蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌11620℃分钟。5.3.5生理盐水称取9g氯化钠，加水1000ml溶解，分装后于121±0.5℃℃湿热灭菌30分钟，供作稀释剂用。5.3.675%酒精棉量取无水乙醇75ml，加水稀释至100ml，摇匀，将脱脂棉与75%酒精混合即得。5.3.70.1%新洁而灭第3页/共6页第3页共8页第2页共8页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共8页量取5%新洁而灭20ml，加水稀释至约1000ml，摇匀，即得。5.4进入无菌室的操作要点用肥皂水洗手，换消毒鞋，关闭缓冲间紫外灯，将用具物品搬入传递窗口内，用紫外灯灭菌15分钟，关闭第一层门，用1%新洁而灭洗涤双手，用消毒毛巾擦干，换上无菌衣、裤、帽子、口罩及消毒鞋。关闭无菌室内紫外灯，进入第二层门并将用具搬至无菌室内，关闭无菌室门。凡进入无菌室后不应再外出取物品，因此，在每次试验中所用物品必须计划好，并准备好备用物品。从进入第一层门直至无菌室内，随工作人员的进入就喷雾0.1%新洁而灭溶液。5.5检查法：5.5.1细菌、霉菌的染菌量，采用培养皿菌落计数法。5.5.1.1供试液的制备：固体供试品以无菌操作称取10g，置含0.9%氯化钠的生理盐水100ml中，振摇溶解，使成1:10稀释度的供试液。然后吸取1:10的供试液1ml，置含0.9%氯化钠的生理盐水9ml中，稀释成1:100稀释度的供试液。依次可制成1:1000的供试液。5.5.1.2吸样：分别吸取1:10、1:100、1:1000的供试液1ml分别注...
