3200QTrap液质联用仪作业指导书VIP免费

ABI3200QTrap高效液相色谱串联质谱联用仪作业指导书（草稿）******食品检测中心实验室（2008年12月修订）本《作业指导书》依据《高效液相色谱仪方法通则》（JY/T024-1996）、《有机质谱分析方法通则》（JY/T003-1996）和美国应用生物系统公司《3200QTRAP液质联用仪操作手册》有关内容编写。一、检测仪器1、仪器名称高效液相色谱串联质谱联用仪（简称LC-MS-MS）。型号：3200QTRAP（美国AppliedBiosystems公司）。2、仪器组成液相色谱部分：Agilent1200RRLC，配有在线脱气机、超高压二元泵、自动进样器；串联质谱部分：ABI3200QTRAP，配有TurboVTM离子源、串联四级杆/线性离子阱。3、主要性能指标离子化方式：ESI和APCI电离质量范围：（5~1700）amu分辨率：>6900质量稳定性：0.1amu/12h灵敏度：1pgreserpine,ESI+,MRM扫描（m/z:609/195），信噪比S/N>120:1扫描速度：4000amu/sec质量准确度：<0.01%（全质量数范围）4、方法原理高效液相色谱二元泵将流动相泵人系统并混合，自动进样器将待测样品注入流动相中，随流动相进入色谱柱，由于样品不同组分在色谱柱中保留时间不同，各组分被分开，依次进入离子源。在离子源中，各组分以ESI或APCI方式电离，被加速后进入质量分析器。3200QTRAP的质量分析器主要由Q1、Q2、Q3三组四级杆串联组成（如图1所示）。Q1可将分子离子按质荷比（m/z）大小分开；Q2是碰撞室，可将母离子进一步破碎为碎片离子；Q3具有四级杆和线性离子阱两种功能，作为四级杆时可将分子离子或碎片离子按质荷比大小分开，作为离子阱还可富集离子从而提高检测灵敏度。各组分的不同离子在质量分析器中被破碎、分离，并按质荷比大小依次抵达监测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质谱图。3200QTRAP通过串联四级杆/线性离子阱两种不同质谱技术的结合，可以在单次分析中对复杂样本中的单个成分同时进行定性和定量，也可以对多个化合物进行定量分析。整台仪器的控制、数据采集、数据处理、结果输出均由PC计算机WindowsXP操作系统支持下的Analyst1.5软件控制完成。离子源质量分析器监测器图13200QTRAP质量分析器示意图二、样品1、样品要求本仪器适合分子量在5~1700amu范围内的有机样品的定性及定量分析。待测样品必须能溶解于水或其它有机溶剂中。若样品或配制的样品溶液发生沉淀、挥发、变质等异常现象时，应重新取样或重新配制溶液。2、试剂要求所有的试剂均选用色谱纯级，所用水的电导率应大于18KΩ。流动相必须用0.2µm或0.45µm滤膜过滤后方可使用。3、分离条件要求在液相色谱仪上确定分离条件，使待测组分能完全分离，且该色谱条件中流动相不应含有不挥发性盐，如磷酸盐。三、操作步骤实施检测操作的人员，必须熟悉该仪器的操作规程，仪器的工作状态、包括检测灵敏度和分辨率，必须满足检测项目的要求。1、开机前准备开机前应检查仪器室内电、气的供应情况及空调机的工作状态是否稳定，检查真空机械泵泵油是否需要更换。只有当UPS工作正常，Gas1/Gas2、CurtainGas和ExhaustGas的压力分别稳定在0.35、0.35和0.7Mpa，环境温度为10~30℃，相对湿度小于70%时才能开机。2、开机1)打开真空机械泵上的电源开关。2)真空机械泵继续工作至少15分钟后，打开MS电源主开关。3)等真空度达到2×10-5Torr（绿色指示灯不闪）后，打开PC计算机电源。3、仪器调谐参照《3200QTRAP操作指南》和《3200QTRAP安装指南》进行调谐校准，使得到的标准谱图的质量准确度、质量稳定性、扫描分辨率和灵敏度达到要求的指标。4、建立分析方法1)双击Analyst图标打开软件，建立或选择Project，在Configure模式中双击HardwareConfiguration，打开HardwareConfigurationEditor，激活MassSpectrometryOnly。2)双击TuneandCalibrate模式中的ManualTuning，用针泵进样，然后手动优化DP、EP、CEP、CXP、CE、CAD等Compound-dependent参数，保存质谱方法。3)打开HardwareConfigurationEditor，激活MassSpectrometry、Pump、Autosampler和Oven，在Acquire模式中双击BuildAcquisitionMethod，在File菜单中点击Open，打开保存的方法，在AcquisitionMethod右上角，点击鼠标右键出现Add/RemoveDeviceMethod，添加Pump、Au...