【AbMole科研快报】toll样受体4敲除可通过自噬抑制防止糖尿病引起的骨代谢失衡AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：toll样受体4敲除可通过自噬抑制防止糖尿病引起的骨代谢失衡研究旨在阐明高糖环境下骨代谢自噬的机制及其与toll样受体4(TLR4)的关系。研究人员采用TLR4敲除的糖尿病大鼠模型和小干扰RNA沉默TLR4的MC3T3-E1，观察TLR4敲除或沉默对高血糖诱导骨损伤的保护机制。抑制TLR4表达可改善骨代谢和骨结构;促进碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)分泌，增强骨形态发生蛋白BMP-2表达，促进骨矿化，降低高血糖诱导的成骨细胞凋亡。TLR4敲低或沉默可降低动物和细胞水平上炎症因子IL-1、IL-6和TNF-ɑ1的水平，抑制炎症通路蛋白的表达，下调Beclin1和LC3II/LC-1蛋白的表达。抑制自噬活性可增强TLR4敲低后的骨保护作用，提高细胞存活率，降低成骨细胞凋亡率，促进BMP-2蛋白水平及碱性磷酸酶和OCN分泌。相反，自噬的激活显著加剧成骨细胞凋亡，降低BMP-2蛋白水平，抑制碱性磷酸酶(ALP)和OCN分泌。BafilomycinA1(Baf-A1)(Abmole,M4953)是一种液泡H+-ATPase抑制剂，IC50为0.44nM。BafilomycinA1是一种衍生自灰色链霉菌的有毒的大环内酯类抗生素。BafilomycinA1抑制外套膜上皮细胞(OME)诱导的短路电流。BafilomycinA1的IC50和最大抑制剂量分别为0.17μM和0.5μM。BafilomycinA1防止H.pylori细胞诱导的Hela细胞空泡化，50%最大抑制浓度(ID50)为4nM。BafilomycinA1能够有效使空泡细胞恢复到正常形态。BafilomycinA1(1μM和0.1μM)完全抑制培养的破骨细胞的再摄取活性。BafilomycinA1剂量依赖性抑制年轻罗非鱼体内Na+的摄取，Ki为0.16μM。作者在研究过程中，使用自噬抑制剂(巴菲霉素)和激动剂(雷帕霉素)抑制和激活自噬，验证它们是否影响TLR4敲除介导的骨保护。结果显示，抑制剂处理降低了自噬活性，从而增强了TLR4敲除的骨保护作用，提高了细胞存活率。降低成骨细胞凋亡率，促进BMP-2蛋白水平、ALP和OCN分泌。鸣谢：ZhangY,ShenX,ChengL,etal.Toll-likereceptor4knockoutprotectsagainstdiabetic-inducedimbalanceofbonemetabolismviaautophagicsuppression[J].MolecularImmunology,2020,117:12-19.
