电脑桌面
添加小米粒文库到电脑桌面
安装后可以在桌面快捷访问

小麦生理参数测定方法VIP免费

小麦生理参数测定方法_第1页
1/15
小麦生理参数测定方法_第2页
2/15
小麦生理参数测定方法_第3页
3/15
叶绿素含量测定原理叶绿素约占总干重的1%,含a、b、c、d四种,高等植物含a、b两种,光、温度、营养元素氧、水是叶绿素合成的重要环境因子。叶绿素是双羧酸酯,不溶于水,通常用含少量水的有机溶剂如80%的丙酮或95%的乙醇来提取叶片中的叶绿素,这是因为叶绿素与蛋白质结合很牢固,需要经过水解作用才可被提取出来。已知叶绿素a、b的95%乙醇提取液最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm,用95%乙醇研磨法和浸泡法提取叶绿素,以提取试剂95%乙醇为对照,用分光光度计分别测定649nm、665nm处的吸光度并计算叶绿素浓度,计算公式为:Ca=13.95D665-6.88D649;Cb=24.96D649-7.32D665;CT=Ca+Cb(注:Ca:叶绿素a的含量;Cb:叶绿素b的含量;CT:总叶绿素的含量)仪器:研钵、25mL容量瓶、漏斗、剪刀、滤纸、722光栅分光光度计、具塞试管试剂:95%乙醇(AR)丙酮(AR)1:1、碳酸钙(AR)、石英砂(AR)实验方法称取小麦叶片0.2g剪碎置于研钵中,加少许CaCO3,石英砂、95%乙醇充分研磨,过滤,将滤液移入25mL容量瓶,用95%乙醇(AR)丙酮(AR)1:1反复洗涤残渣、滤纸至无绿色,合并滤液,定容。取上述提取液1mL稀释至10mL,摇匀。以95%乙醇为参照,在分光光度计665nm/649nm下测其光密度。Chla含量(mg/g)=(13.95D665-6.88D649)V/(W1000)Chlb含量(mg/g)=(24.96D649-7.32D665)V/(W1000)式中:A--测定波长下的光密度值V--叶绿素提取液总体积(mL)(若用的稀释液,则应乘以稀释倍数)W—材料鲜重(g)含量:mg/g=(浓度*提取体积*稀释倍数)/样品鲜重(植物生理学实验指导李玲)参考文献《化学生态学实验指导书》-王晗光编写SOD的测定原理:SOD可催化下列反应:仪器:高速冷冻台式离心机;分光光度计;移液器;光照培养箱;指形管;研钵试剂:1.50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.8)2.130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液:称取1.9339gMet用磷酸缓冲液溶解定容至100mL3.750/LNBT(氮蓝四唑)溶液:称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液溶解定容至100mL,避光保存4.20L核黄素溶液:称取0.0750g核黄素用磷酸缓冲液溶解定容至l00mL,吸取1mL定容至100mL即可,随用随配,避光保存5.100mol/LEDTA-Na2溶液:称取0.0372gEDTA-Na2·2H20,用磷酸缓冲液溶解并定容至100mL,吸取10mL定容至100mL即可。6.SOD提取介质:50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.8)内含1%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。(材料)正常生长或经逆境处理的植物组织器官实验方法:1.取小麦叶片(去叶脉)0.5g于预冷的研钵中,加1mL磷酸缓冲液在冰浴下研磨成匀浆,倒入10mL刻度试管中,加缓冲液定容为5mL。取2mL于离心管离心20min,上清液即为SOD粗提液。2.每个样品取8个洁净干燥的微烧杯(透明度好)编号,按表加入各试剂,反应系统总体积为3mL。其中4~8号管中磷酸缓冲液和酶液的加入量依样品中的酶活性进行调整,如果酶活性强时,可适当减少酶液用量。试剂全部加入后混匀,将1号杯置于暗处,其余各杯均于25℃、4000lx日光灯下反应20min,各管受光情况要一致。温度高时,时间缩短;温度低时,时间延长,然后立即遮光停止反应。反应系统中各试剂用量在560nm波长下,以1号杯调零,测定其余各杯反应体系的吸光度。以2、3号杯吸光度的平均值作为还原率的100%,分别计算不同酶液量抑制NBT光还原的相对百分率。以酶液用量(pL)为横坐标,以NBT光化还原的抑制率(%)为纵坐标绘制二者相关曲线,NBT光化还原被抑制50%的酶液量为一个酶活单位。SOD总活性[u/g]=(ACKAE)VTSOD总活性SOD比活性[u/mg]=0.5ACKWVS蛋白质含量ACK:照光对照管的吸光度AE:样品管的吸光度VT:样品液总体积(ml)W:样品鲜重(g)VS:测定时样品用量(g)参考文献《植物生理学实验教程》-张立军,樊金娟主编2007《基础生物学实验教程》-王德良,周小慧主编2006POD的测定原理:过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系。在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化。因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。在有过氧化氢存在的条件下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色物质。该物质在470nm处有最大吸收,可用分光光度计测...

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在违规,或者侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“违规举报”。

碎片内容

小麦生理参数测定方法

确认删除?
VIP
微信客服
  • 扫码咨询
会员Q群
  • 会员专属群点击这里加入QQ群
客服邮箱
回到顶部