小麦生理参数测定方法VIP专享VIP免费

叶绿素含量测定原理叶绿素约占总干重的1%，含a、b、c、d四种，高等植物含a、b两种，光、温度、营养元素氧、水是叶绿素合成的重要环境因子。叶绿素是双羧酸酯，不溶于水，通常用含少量水的有机溶剂如80%的丙酮或95%的乙醇来提取叶片中的叶绿素，这是因为叶绿素与蛋白质结合很牢固，需要经过水解作用才可被提取出来。已知叶绿素a、b的95%乙醇提取液最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm，用95％乙醇研磨法和浸泡法提取叶绿素，以提取试剂95％乙醇为对照,用分光光度计分别测定649nm、665nm处的吸光度并计算叶绿素浓度，计算公式为：Ca＝13.95D665－6.88D649；Cb＝24.96D649－7.32D665；CT＝Ca＋Cb(注：Ca：叶绿素a的含量；Cb：叶绿素b的含量；CT：总叶绿素的含量)仪器：研钵、25mL容量瓶、漏斗、剪刀、滤纸、722光栅分光光度计、具塞试管试剂：95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1、碳酸钙（AR）、石英砂（AR）实验方法称取小麦叶片0.2g剪碎置于研钵中，加少许CaCO3，石英砂、95%乙醇充分研磨，过滤，将滤液移入25mL容量瓶，用95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1反复洗涤残渣、滤纸至无绿色，合并滤液，定容。取上述提取液1mL稀释至10mL，摇匀。以95%乙醇为参照，在分光光度计665nm/649nm下测其光密度。Chla含量（mg/g）=(13.95D665－6.88D649)V/(W1000)Chlb含量（mg/g）=（24.96D649－7.32D665）V/(W1000)式中：A--测定波长下的光密度值V--叶绿素提取液总体积（mL）（若用的稀释液，则应乘以稀释倍数）W—材料鲜重（g）含量：mg/g=（浓度*提取体积*稀释倍数）/样品鲜重（植物生理学实验指导李玲）参考文献《化学生态学实验指导书》-王晗光编写SOD的测定原理：SOD可催化下列反应：仪器：高速冷冻台式离心机；分光光度计；移液器；光照培养箱；指形管；研钵试剂：1.50mmol/L磷酸缓冲液(pH7．8)2.130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液：称取1.9339gMet用磷酸缓冲液溶解定容至100mL3.750/LNBT（氮蓝四唑）溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液溶解定容至100mL，避光保存4.20L核黄素溶液：称取0．0750g核黄素用磷酸缓冲液溶解定容至l00mL，吸取1mL定容至100mL即可，随用随配，避光保存5.100mol/LEDTA-Na2溶液：称取0．0372gEDTA-Na2·2H20，用磷酸缓冲液溶解并定容至100mL，吸取10mL定容至100mL即可。6.SOD提取介质：50mmol/L磷酸缓冲液(pH7．8)内含1％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。(材料)正常生长或经逆境处理的植物组织器官实验方法：1.取小麦叶片(去叶脉)0.5g于预冷的研钵中，加1mL磷酸缓冲液在冰浴下研磨成匀浆，倒入10mL刻度试管中，加缓冲液定容为5mL。取2mL于离心管离心20min，上清液即为SOD粗提液。2.每个样品取8个洁净干燥的微烧杯(透明度好)编号，按表加入各试剂，反应系统总体积为3mL。其中4～8号管中磷酸缓冲液和酶液的加入量依样品中的酶活性进行调整，如果酶活性强时，可适当减少酶液用量。试剂全部加入后混匀，将1号杯置于暗处，其余各杯均于25℃、4000lx日光灯下反应20min，各管受光情况要一致。温度高时，时间缩短；温度低时，时间延长，然后立即遮光停止反应。反应系统中各试剂用量在560nm波长下，以1号杯调零，测定其余各杯反应体系的吸光度。以2、3号杯吸光度的平均值作为还原率的100％，分别计算不同酶液量抑制NBT光还原的相对百分率。以酶液用量(pL)为横坐标，以NBT光化还原的抑制率(％)为纵坐标绘制二者相关曲线，NBT光化还原被抑制50％的酶液量为一个酶活单位。SOD总活性[u/g]=(ACKAE)VTSOD总活性SOD比活性[u/mg]=0.5ACKWVS蛋白质含量ACK：照光对照管的吸光度AE：样品管的吸光度VT：样品液总体积（ml）W：样品鲜重（g）VS：测定时样品用量（g）参考文献《植物生理学实验教程》-张立军，樊金娟主编2007《基础生物学实验教程》-王德良，周小慧主编2006POD的测定原理：过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系。在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化。因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质。该物质在470nm处有最大吸收，可用分光光度计测...