液质联用法测定甲磺酸仑伐替尼中甲磺酸酯类基因毒性杂质含量摘要：甲磺酸酯类属于烷化剂，可能引起基因损伤，具有潜在的遗传毒性，根据ICHM7指导原则，按毒理学关注阈值TTC法计算：每日摄入限度为1.5μg/人/天，本品每日最大摄入量为29.4mg，TTC=（1.5μg/人/天）/（29400μg/天）≈0.005%，故拟定362项目中磺酸酯类的限度均为0.005%。本公司采用气相色谱法和质谱法自主开发四种磺酸酯类的测定方法，根据中国药典2015年版四部通则对测定方法进行方法学验证，验证的内容包括专属性、检测限与定量限、线性和范围、准确度、重复性和耐用性。关键词：甲磺酸酯；含量测定；方法分析1.试剂信息表1验证使用的仪器与试药信息3.分析方法色谱柱：AgilentDB-624毛细管柱（30m×0.32mm×1.8μm）柱温：120℃保持5分钟，25℃/分钟升温至230℃，保持10分钟进样口温度：250℃柱流速：1.5ml/min进样方式：直接进样检测器：质谱检测器（EI），选择SIM模式，甲磺酸甲酯选择离子为65/79/95；甲磺酸乙酯选择离子为79/97/109；甲磺酸异丙酯选择离子为79/123；甲磺酸丙酯选择离子为79/97/109。离子源温度：230℃四级杆温度：150℃进样体积：1μl分流比：5：1载气：氮气稀释剂：二氯甲烷4.专属性供试品溶液：取本品约40mg，精密称定，置于15ml离心管中，加5ml二氯甲烷和5ml水，振摇2min，于每分钟8000rpm的转速下离心5分钟，取下层二氯甲烷层滤过作为供试品溶液。对照品溶液：取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸丙酯和甲磺酸异丙酯各适量，精密称定，分别加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中各约含甲磺酸甲酯0.4μg、甲磺酸乙酯0.4μg、甲磺酸丙酯0.4μg、甲磺酸异丙酯0.4μg的溶液，作为对照品溶液。混合溶剂溶液：取丙酮、异丙醇、乙醇、乙酸正丙酯、乙酸异丙酯、正丙醇、二甲基亚砜、N，N-二甲基甲酰胺、吡啶、甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸丙酯和甲磺酸异丙酯各适量，精密称定，加溶剂定量稀释制成每lml中分别含丙酮100μg、异丙醇100μg、乙醇100μg、正丙醇100μg、乙酸正丙酯100μg、乙酸异丙酯100μg、二甲基亚砜100μg、N，N-二甲基甲酰胺17.6μg、吡啶4μg、甲磺酸酯类各0.4μg的混合溶液，即得；标记供试品溶液：取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸丙酯和甲磺酸异丙酯各适量，精密称定，分别加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中各约含甲磺酸甲酯40μg、甲磺酸乙酯40μg、甲磺酸丙酯40μg、甲磺酸异丙酯40μg的溶液，作为混合对照品溶液；取362-1约40mg，精密称定，置于15ml离心管中，加入混合对照品溶液50μl，加5ml二氯甲烷和5ml水，振摇2min，于每分钟8000rpm的转速下离心5分钟，取下层二氯甲烷层滤过作为标记供试品溶液。照上述色谱条件，分别精密量取上述溶液各1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，要求空白溶剂和工艺有关溶剂不干扰各溶剂测定，各溶剂峰之间分离度大于1.5，样品不干扰各溶剂测定。具体试验结果见表3～表4，图1～图5。表3专属性试验结果结果表明：在质谱的SCAN模式确定各已知杂质特征离子分别为甲磺酸甲酯选择离子（m/z）为65/79/95，甲磺酸乙酯选择离子为79/97/109，甲磺酸异丙酯选择离子为79/123，甲磺酸丙酯选择离子为79/97/109；选择丰度较强的杂质作为检测离子分别为甲磺酸甲酯m/z79，甲磺酸乙酯m/z79，甲磺酸异丙酯m/z123和甲磺酸丙酯m/z109在各离子通道下，空白溶剂不干扰杂质检测，二甲基亚砜与甲磺酸甲酯之间分离度为1.6；标记供试品溶液与混合对照品溶液中各成分峰保留时间一致，样品不干扰各溶剂测定。5.线性和范围取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸丙酯和甲磺酸异丙酯各适量，精密称定，用稀释剂定量稀释制成相当于各溶剂限度浓度的10%、20%、40%、80%、100%、120%、150%与200%系列浓度的溶液，分别作为系列线性溶液。照上述色谱条件，分别精密量取上述线性溶液各1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。以进样浓度（μg/ml）为横坐标（x），平均峰面积为纵坐标（y），进行线性回归分析，要求峰面积与浓度呈良好线性关系，线性相关系数（r）不小于0.990，Y轴截距偏差不大于25%，响应因子RSD不大于15%。6.检测限与定量限取已知浓度的各溶剂对照品贮备液用稀释剂逐级定...
