课题课题22土壤中分解尿素的细菌的土壤中分解尿素的细菌的分离与计数分离与计数一、课题背景一、课题背景11、尿素的利用、尿素的利用尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业氮肥。农业氮肥。尿素尿素不能直不能直接接被农作物被农作物吸收。吸收。土壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才能被植物利用。之后才能被植物利用。22、细菌利用尿素的原因、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶CO(NHCO(NH22))22脲酶脲酶+CO+CO2222NHNH33+H+H22OO硝化细菌是指能够氧化无机氮化物,从中获取能量,从而把二氧化碳合成为有机物的一类细菌。硝化细菌合成有机物的过程表示如下：2NH3+3O2→(硝化细菌)2HNO2+2H2O+能量2HNO2+O2→(硝化细菌)2HNO3+能量6CO2+6H2O→(能量)C6H12O6NH3既是硝化细菌的氮源，也是其能源。思考：硝化细菌的新陈代谢类型是什么？11、实验室中微生物的筛选原理：、实验室中微生物的筛选原理：人为提供人为提供有利于目的菌株生长有利于目的菌株生长的条件的条件((包括营养、温度、包括营养、温度、pHpH等等))，同时，同时抑制或阻抑制或阻止其他微生物止其他微生物生长。生长。什么是选择性培养基？什么是选择性培养基？P22P22页页22、方法：、方法：利用选择培养基分离二、筛选菌株二、筛选菌株15.0g15.0g琼脂琼脂1.0g1.0g尿素尿素10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖0.2g0.2gMgSOMgSO4`4`7H7H22OO2.1g2.1gNaNa22HPOHPO441.4g1.4gKHKH22POPO4433、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：养基：①①从物理性质看此培养基属于哪类？从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基固体培养基②②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：碳源：葡萄糖、尿素葡萄糖、尿素氮源：氮源：尿素尿素培养基的培养基的氮源为尿素氮源为尿素，只有能合成，只有能合成脲酶脲酶的微的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。44、培养基选择分解尿素的微生物的原理、培养基选择分解尿素的微生物的原理11、显微镜直接计数：、显微镜直接计数：利用利用血球计数板血球计数板，在显微镜下计算一定容积样，在显微镜下计算一定容积样品中微生物的数量。品中微生物的数量。㈡㈡..统计菌落数目：统计菌落数目：利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一种微生物计数法显微镜直接计数法其原理与计数板的构造有关每块计数板上有两个计数室（正方形），盖上盖玻片后容积是一定的（0.1mm3），深为0.1mm，边长为1mm，其上面有精确的刻度。其刻度一般有两种规格16个中方格，每个中方格分25个小格16×2525个中方格，每个中方格分16个小格25×16计数室计数室我们采用的是25×16的，计数时查5个小方格的总菌数。如图：计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×16×1000×B=50,000A×B个5个方格的总菌数稀释倍数每毫升原液所含细菌总数=每小格平均细菌数×400×1000×稀释倍数注：400=25×16，表示400个小格，1000表示1mL=1㎜31.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖盖玻片。2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。3.用10×物镜观察并将计数室移至视野中央。4.在10×物镜下计数：计数4个（或5个）小格的菌体总数，然后求得平均值。乘上400就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。5.注意事项：计上不计下，计左不计右。实验步骤：不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；缺点：缺点：2.2.间接计数法（间接计数法（活菌计数法）活菌计数法）⑴⑴原理：原理：在稀释度在稀释度足够高足够高时，微生物在固体培时，微生物在固体培养基上所形成的养基上所形成的一个...
