凝胶过滤层析2VIP免费

凝胶过滤层析凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。定义凝胶过滤层析是生化分离常用凝胶过滤层析是生化分离常用色谱技术色谱技术的一种。的一种。利用具有网状结构的凝胶的利用具有网状结构的凝胶的分子筛分子筛作用作用,,根据被分离根据被分离物质的物质的分子大小不同分子大小不同来进行分离，也被称为体积排阻来进行分离，也被称为体积排阻层析（层析（sizeexclusionchromatographysizeexclusionchromatography）、分子筛）、分子筛层析（层析（MolecularSieveChromatographyMolecularSieveChromatography）、凝胶）、凝胶渗透层析（渗透层析（GelPermeationChromatographyGelPermeationChromatography））应用凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多肽、激素、多糖、核酸类等物质。肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大小彼此相差分子大小彼此相差25%25%的样品，只要通过单一的样品，只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开。凝胶床就可以完全将它们分开。利用凝胶的分子筛特性，可对这些物质的溶液利用凝胶的分子筛特性，可对这些物质的溶液进行进行脱盐、去热源和脱色脱盐、去热源和脱色。。原理凝胶是一类多孔性高分子聚合物，每凝胶是一类多孔性高分子聚合物，每个颗粒犹如一个筛子。个颗粒犹如一个筛子。当样品溶液通过凝胶柱时，当样品溶液通过凝胶柱时，相对分子相对分子质量较大质量较大的物质沿着凝胶颗粒间的孔的物质沿着凝胶颗粒间的孔隙，随着溶剂流动，首先流出层析隙，随着溶剂流动，首先流出层析柱；柱；相对分子质量较小相对分子质量较小的物质可自由地进的物质可自由地进出凝胶颗粒的网孔，使流量增长，移出凝胶颗粒的网孔，使流量增长，移动速率慢而最后流出层析柱。动速率慢而最后流出层析柱。中等大小的分子中等大小的分子在大分子物质与小分在大分子物质与小分子物质之间被洗脱。子物质之间被洗脱。这样，经过层析柱，混合物中的各物这样，经过层析柱，混合物中的各物质按其分子大小不同而被分离。质按其分子大小不同而被分离。带网孔的葡聚糖珠小分子进入葡聚糖珠内大分子不能进入珠内，经珠之间缝隙流出固定相（凝胶）三维空间网状结构样品样品固定相流动相小分子被延滯小分子大分子较快流出分子筛效应分子筛效应：：按分子大小不同按分子大小不同,,在凝胶受到的在凝胶受到的阻滞作用阻滞作用有差异有差异,,从而造成各组分在从而造成各组分在凝胶柱中的迁移速度不同得到分离。凝胶柱中的迁移速度不同得到分离。基本概念外水体积外水体积(Vo)(Vo)是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒间液体流动相的体积。间液体流动相的体积。内水体积内水体积(Vi)(Vi)是指凝胶颗粒中孔穴的体积。是指凝胶颗粒中孔穴的体积。基质体积基质体积(Vg)(Vg)是指凝胶颗粒实际骨架体积。是指凝胶颗粒实际骨架体积。柱床体积柱床体积(Vt)(Vt)就是指凝胶柱所能容纳的总体积。就是指凝胶柱所能容纳的总体积。洗脱体积洗脱体积(Ve)(Ve)是指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积是指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积凝胶层析柱各种体积示意图（阴影部凝胶层析柱各种体积示意图（阴影部分）分）分配系数（Kd）Ve=Vo+Ve=Vo+KdKdViVi(2)Ve=Vo+Vi，Kd=1分子完全不被排阻完全向凝胶颗粒内部扩散在两相分配的比值为1,最后流出(1)Ve=Vo，Kd=0分子完全被排阻于凝胶颗粒之外全部分布于流动相里最先流出(3)0