第六章微生物的生长及控制VIP专享VIP免费

第六章微生物的生长及其控制生物个体由小到大的增长，即表现为细胞组分与结构在量方面的增加生长指生物个体数目的增加繁殖在单细胞微生物中，生长繁殖的速度很快，而且两者始终交替进行，个体生长与繁殖的界限难以划清，因此实际上常群体生长作为衡量微生物生长的指标。个体生长→个体繁殖→群体生长群体生长＝个体生长＋个体繁殖在微生物的研究和应用中，只有群体的生长才有实际意义。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。群体生长的实质是包含着个体细胞生长与繁殖交替进行的过程，称之为发育。第一节测定生长繁殖的方法微生物学中将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。一、纯培养的分离方法（一）、稀释法液体稀释法固体稀释倒平板法稀释倒平板法（二）、平板划线分离法用接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。（三）、单孢子或单细胞分离法采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。在显微镜下使用单孢子分离器进行机械操作，挑取单孢子或单细胞进行培养。也可以采用特制的毛细管在载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，然后移到合适的培养基进行培养。（四）、选择性培养基分离法各种微生物对不同的化学试剂、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用这些特性可配制合适某种微生物而限制其它微生物生长的选择培养基，用它来培养微生物以获得纯培养。微生物纯培养分离方法的比较分离方法应用范围平皿划线法方法简便，多用于分离细菌稀释倒平皿法即可定性，又可定量，用途广泛单细胞挑取法局限于高度专业化的科学研究利用选择培养基法适用于分离某些生理类型较特殊的二、微生物生长繁殖的测定测定微生物生长的方法根据：生长意味着原生质含量的增加（一）测生长量1、直接法测体积称干重：1mg干菌体=5-10mg湿菌体=5-10×107个菌体2、间接法比浊法生理指标法比浊法生理指标测定法常用于对微生物的快速鉴定与检测微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、生物热等与其群体的规模成正相关。与微生物生长量相平行的生理指标：含氮量、含碳量、几丁质含量、DNA、RNA等等蛋白质总量=含N量%×6.25(二)计繁殖数即计算微生物的个体数目计繁殖数只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子1、直接法所得的结果是包括死细胞在内的总菌数a、涂片染色法原菌液含菌数/mL=视野中平均菌数×视野个数/cm2×100×稀释倍数b、比例计数法c、血球计数板利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察。原菌液含菌数/mL=每小格平均数×400×10000×稀释倍数2、间接法原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。所测的菌落就是待测样品所含的活菌数。平板菌落计数法优点：适用于多种材料；菌数较少也能准确测定。缺点：并非所有微生物在试验期间都能长出菌落；意外的损伤可能导致菌落减少；肉眼无法观察的菌落。活菌指示剂：TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）厌氧的菌落计数法亨格特的预还原灭菌厌氧培养基的转管技术、气体喷射培养法厌氧手套箱培养法用于要求严格的厌氧培养法的微生态学（正常菌群）的研究工作厌氧罐(袋)法结合其它厌氧培养方法不适用于对氧极其敏感的厌氧菌。但是在临床细菌的检验工作中，可以充分使用此法分离感染症中的厌氧病原菌。一、同步培养概念：同步培养(synchronousculture)是一种培养方法，它能使群体中不同步的细胞转变成能同时进行生长或分裂的群体细胞。同步生长：以同步培养方法使群体细胞能处于同一生长阶段，并同时进行分裂的生长方式同步培养物常被用来研究在单个细胞上难以研究的生理与遗传特性和作为工业发酵的种子，它是一种理想的材料。第二节微生物的生长规律同步培养方法机械方法环境条件诱导法离心方法过滤分离法硝酸纤...