综合实训三水中菌落总数及大肠菌群数的测定任务二水中大肠菌群数的测定项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定水中总大肠菌群的测定•检验依据：GB/T5750.12-2006•方法：多管发酵法项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定总大肠菌群•总大肠菌群–37℃、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢杆菌粪大肠菌群（耐热--）•总大肠菌群非粪大肠菌群EC肉汤44.5士0.5℃项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定总大肠菌群•MPN（mostprobablenumber）–最可能数或最近似数•总大肠菌群MPN–100mL水样中所含的总大肠菌群的最近似数或最可能数项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定指示菌（总大肠菌群）•指示菌应具有的条件和肠道致病菌的来源相同在外界环境中的生存时间长检验方法比较简便项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定实验目标•掌握生活饮用水总大肠菌群的测定方法•掌握水源水总大肠菌群的测定方法•判定水被肠道致病菌污染的程度和水的卫生质量项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定实验内容1乳糖发酵试验4证实试验5结果分析与报告1培养基制备2乳糖发酵试验3分离培养项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定实验器材•水样–生活饮用水、水源水•培养基–乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基•试剂–革兰氏染色液、稀释剂等项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定实验器材•其他–无菌工作台、酒精灯、稀释液、灭菌吸管、灭菌试管、小倒管、试管架、接种环、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、载玻片、香柏油、平皿、天平、电炉等项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定培养基制备•乳糖发酵管–双料管–单料管•伊红美兰平板放置小倒管并排气项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定检验程序生活饮用水接种乳糖发酵试验分离培养证实试验结果报告水源水稀释与接种项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定一、乳糖发酵（初发酵）试验•自来水–直接接种10mL水样于双料培养基，每个水样共接种5管•水源水–加大稀释度，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定各10ml1ml各1ml水样1:10稀释水各1ml乳糖发酵试验项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定一、乳糖发酵（初发酵）试验•培养–36℃士l℃–24h士2h•观察产酸产气情况–不产酸产气–产酸产气项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定第二天项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定二、分离培养•产酸产气的发酵管分别转种EMB平板（分区划线）–36℃士l℃–24h士2h项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定第三天项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定三、证实试验（复发酵试验）•观察EMB平板菌落形态–深紫黑色、具有金属光泽的菌落–紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落–淡紫红色、中心较深的菌落项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定一半进行涂片、染色、镜检另一半进行接种（证实试验用）项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定三、证实试验（复发酵试验）•只有染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌才接种乳糖蛋白胨管–36℃士l℃–24h士2h项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定第四天项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定四、结果报告•观察乳糖发酵管产气情况–产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在•查MPN检索表–根据证实为总大肠菌群阳性的管数•报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定四、结果报告•5管法结果见表1，15管法结果见表2项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定四、结果报告表1用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN)5个10mL管中阳性管数最可能数（MPN）0<2.212.225.139.2416.05>16.0项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定四、结果报告表2总大肠菌群MPN检索表(部分）（总接种量55.5mL，其中5份10mL水样，5份1mL水样，5份0.1mL水样）接种量/mL总大肠菌群/(MPN/100mL)接种量/mL总大肠菌群/(MPN/100mL)10ml管1ml管0.1ml管10ml管1ml管0.1ml管000<21002001210140024102600351038004710410005910512项目九综合实训---水中总大肠菌群的测定四、结果报告•稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数–表2采用3个...
