透射电子显微镜生物制品制备技术组织学与胚胎学教研室：苏衍萍组织学与胚胎学教研室：苏衍萍冷冻蚀刻法超薄切片冷冻蚀刻法冷冻割断术细胞化学法免疫组织化学技术免疫电镜法电镜放射自显影术放射自显影技术扫描电镜技术被吞噬的红细胞现有的透射电镜生物制品制备技术分为两类：现有的透射电镜生物制品制备技术分为两类：一类是透射电镜的基本制备技术，包括超薄一类是透射电镜的基本制备技术，包括超薄切片和负染色法；切片和负染色法；另一类是生物制品的特殊技术，其中包括冷另一类是生物制品的特殊技术，其中包括冷冻蚀刻法、冰冻割断术、细胞化学法、免疫冻蚀刻法、冰冻割断术、细胞化学法、免疫电镜法、放射自显影技术、电镜法、放射自显影技术、XX线微区分析技线微区分析技术等。术等。11、超薄切片样品的制备、超薄切片样品的制备（（11）取材基本要求是在活体情况下进行）取材基本要求是在活体情况下进行取材的原则取材的原则((快、准、轻、小、冷的原则）快、准、轻、小、冷的原则）11）快速：）快速：11分钟之内投入固定液。分钟之内投入固定液。22）块小：）块小：0.5-10.5-1mmmm33或截面或截面11mmmm22的长条。的长条。33）部位准）部位准44）损伤小：器械应锐利，避免牵拉、挤压，）损伤小：器械应锐利，避免牵拉、挤压，防止组织受机械损伤。防止组织受机械损伤。55）低温：）低温：0-40-4ooCC取材的方法取材的方法11）动物材料：）动物材料：对神经组织等要进行原位固定或灌注固定，待对神经组织等要进行原位固定或灌注固定，待组织适当硬化后再取材。组织适当硬化后再取材。胚胎干细胞的研究胚胎干细胞的研究22）培养细胞：生长在瓶中的细胞到足够的）培养细胞：生长在瓶中的细胞到足够的量，先倒去培养液，然后倒入适量的戊二醛量，先倒去培养液，然后倒入适量的戊二醛固定液，在冰浴下固定液，在冰浴下3-53-5分钟、弯头吸管吹打分钟、弯头吸管吹打或用软器械轻轻地刮下贴壁的细胞，将这种或用软器械轻轻地刮下贴壁的细胞，将这种混合液倒入离心管中，混合液倒入离心管中，20002000rpmrpm低速离心低速离心15-15-2020分钟，使细胞呈团，弃去上清液，换一次分钟，使细胞呈团，弃去上清液，换一次固定液，将其移入修块台，修快成标准块固定液，将其移入修块台，修快成标准块44ooCC固定、待用。固定、待用。33）单细胞悬液：精子、血球等其他不易聚集的悬）单细胞悬液：精子、血球等其他不易聚集的悬浮游离材料，可加入等量的戊二醛和其他类型的浮游离材料，可加入等量的戊二醛和其他类型的固定液，轻轻地把他们悬浮在固定液中。经过固固定液，轻轻地把他们悬浮在固定液中。经过固定定处理后再离心成团，处理后再离心成团，在在5050ooCC中弃去上清液，中弃去上清液，加入适量的经加入适量的经5050ooCC预温的预温的2%2%的琼浆，的琼浆，使团悬浮，将悬浮团使团悬浮，将悬浮团和琼脂液一同在薄片和琼脂液一同在薄片上展层，固定后上展层，固定后切成切成11mm3mm3的小块。的小块。（（22）固定）固定固定的目地是把细胞在活体状态时的固定的目地是把细胞在活体状态时的结构尽可能完整的保存下来，避免自身酶的结构尽可能完整的保存下来，避免自身酶的分解而出现自溶，或外界微生物的侵入而产分解而出现自溶，或外界微生物的侵入而产生腐败，致细胞的超微结构破坏。生腐败，致细胞的超微结构破坏。1）固定液的作用AA．．阻止细胞自溶。阻止细胞自溶。BB稳定细胞物质成分。稳定细胞物质成分。CC在一些组分的分子之间以化学反应和在一些组分的分子之间以化学反应和物理反应建立铰链，提供一个骨架来稳物理反应建立铰链，提供一个骨架来稳定各种细胞的空间结构。定各种细胞的空间结构。DD能提供一定的电子反差能提供一定的电子反差理想的固定剂，应具备以下条件：①能理想的固定剂，应具备以下条件：①能迅速而均匀地渗入组织细胞内部，稳定细迅速而均匀地渗入组织细胞内部，稳定细胞内各种成分；②能即刻将细胞“杀死”，胞内各种成分；②能即刻将细胞“杀死”，尽可能保持细胞微细结构，减少死后变化；尽...
