结核病细菌学检验的标准化结核病细菌学检验的标准化与新诊断技术进展与新诊断技术进展王甦民王甦民20122012年年44月月强化结核病实验室诊断标准化的必要性强化结核病实验室诊断标准化的必要性•1、全球结核病控制的三大挑战：耐药结核病、HIV/艾滋病合并结核病、移民（流动人口）•2、我国结核病疫情依然严重•3、目前结核病实验室诊断技术的不足分类分类•结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、分枝杆菌科的分枝杆菌属，分枝杆菌属种类甚多，目前已命名的有200多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。结核分枝杆菌特点结核分枝杆菌特点结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需要10-20小时细胞壁厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚，含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。抗酸性是分枝杆菌的重要特征。结核病细菌学检查的重要作用结核病细菌学检查的重要作用•细菌学检查是结核病最客观、最科学和最重要诊断方法和流行病学研究工具。因此结核病的实验室检验仍然面临着较多的问题。细菌学检验存在的问题细菌学检验存在的问题•不易于标准化•操作误差较大（可达到30%）1、个人操作误差2、标本性状3、标本来源•对结果的理解差异可影响检验结果对临床治疗的参考或指导意义。主要的细菌学检验技术主要的细菌学检验技术11、痰涂片抗酸染色、镜检技术、痰涂片抗酸染色、镜检技术22、分枝杆菌分离培养技术、分枝杆菌分离培养技术33、分枝杆菌快速培养技术、分枝杆菌快速培养技术44、药物敏感性实验技术、药物敏感性实验技术55、分枝杆菌菌种鉴定技术、分枝杆菌菌种鉴定技术标准的痰涂片抗酸染色、镜检技术标准的痰涂片抗酸染色、镜检技术•标本的收集，特别是痰标本的采集、保存•制片和染色过程的标准化•读片操作的熟练程度和标准化•对结果的理解痰标本的采集、保存和运送痰标本的采集、保存和运送脓样、干酪样或脓性粘液样痰为合格标本，痰量应为3-5毫升。难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但应注明标本性状，以供分析结果时参考。容器上应注明与检验单一致的病人姓名、编号及日期。不能及时检验的痰标本应置4C冰箱保存，如需转运，外送前要认真核对检验单与痰瓶上标注，放在专用的转运箱内运送。标本的采集标本的采集•标本留取方法–痰标本的留取应在医护人员的指导下进行。医护人员应告知病人如何咳痰，合格的痰标本是深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物，并说明唾液检出的可能性很小。–检验人员检查痰标本的性状，并在登记本和检验报告单上注明（按干酪痰、血痰、黏液痰和唾液分类登记）。如何正确留痰如何正确留痰查痰对于结核病的诊断是非常重要的，通过痰检可以知道您是否痰中带菌。如果痰中带有结核菌说明您患有肺结核，具有传染性，应该及时遵医嘱治疗。送检痰标本的质量直接影响检验结果的准确性。请您一定按照下列要求和方法留取合格的痰标本。每个痰盒应分别留取1～2口痰，请不要将1口痰分开放到2或3个痰盒中。•正确的咳痰方法：1、咳嗽前应缓慢地深吸气，吸气后稍屏气片刻。2、躯干略向前倾，两侧手臂屈曲，平放在两侧胸壁下部，内收并稍加力。3、咳嗽时腹肌用力快速收缩，使腹壁内陷。一次深吸气，可连续咳嗽三声。4、停止咳嗽后，收缩腹肌将剩余的气体尽量呼尽。5、重复缓慢吸气动作或平静呼吸片刻，准备再次咳嗽的动作。•*注意：部分人如果忽然深吸气容易诱发咳嗽，您可以尝试缓慢或分几次吸气，争取肺泡内充分充气，以增加咳嗽的效率。在这一过程中，要注意动作的连贯性，一气呵成。同时，也可以叩击前胸，或由家属协助叩击后背胸壁。这样震动支气管内的分泌物，能够增加咳嗽排痰的力度。直接痰涂片检查法直接痰涂片检查法•萋尔-尼尔逊氏（Ziehl－Neelsen）抗酸染色法（热染法）细菌学常规检查细菌学常规检查—直接涂片法—直接涂片法操作流程涂痰膜自然干燥复红加热初染5分钟自然干燥镜检流水冲洗美兰复染30秒盐酸酒精脱色流水冲洗流水冲洗载玻片载玻片（一）新载玻片必须经95%乙醇脱脂，检查无划痕后方可使用。（二）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。（三）载玻片只允许一次性使用，严禁清洗后重复用于AFB检...
