中国组织工程研究第17卷第41期2013–10–08出版ChineseJournalofTissueEngineeringResearchOctober8,2013Vol.17,No.41doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.41.003[http://www.crter.org]程浩，张延芳，许巍.新生大鼠成骨细胞原代培养与鉴定[J].中国组织工程研究，2013，17(41):7199-7204.ISSN2095-4344CN21-1581/RCODEN:ZLKHAH7199www.CRTER.org程浩★，男，1986年生，山东省临沂市人，汉族，2013年广东医学院毕业，硕士，主要从事骨质疏松方面的研究。chenghao712@163.com通讯作者：张延芳，博士，副教授，广东医学院信息工程学院物理教研室，广东省广州市523808zjzyf2006@163.com中图分类号:R318文献标识码:A文章编号:2095-4344(2013)41-07199-06收稿日期：2013-04-05修回日期：2013-07-16(201305122/D·C)ChengHao★,Master,DepartmentofPhysics,SchoolofInformationEngineering,GuangdongMedicalCollege,Guangzhou523808,GuangdongProvince,Chinachenghao712@163.comCorrespondingauthor:ZhangYan-fang,M.D.,Associatechiefphysician,DepartmentofPhysics,SchoolofInformationEngineering,GuangdongMedicalCollege,Guangzhou523808,GuangdongProvince,Chinazjzyf2006@163.comReceived:2013-04-05Accepted:2013-07-16新生大鼠成骨细胞原代培养与鉴定★程浩1，张延芳1，许巍2(1广东医学院信息工程学院物理教研室，广东省东莞市523808；2广西梧州制药(集团)股份有限公司，广西壮族自治区梧州市543002)文章亮点：1实验的特点在于采取3种方法即胶原酶消化法、分段胶原酶消化法及组织块法，从大鼠幼鼠颅骨中分离成骨细胞，区别于传统的一种或者两种方法。能更全面的确定胶原酶消化法是一种方便、高效、理想的原代成骨细胞分离培养方法。2实验所用骨细胞分离部位为大鼠的颅骨，相对骨膜以及骨髓，颅骨面积较大且操作简单。现在成骨细胞原代培养方法众多，实验探索一种操作简便，既经济又高效的原代培养成骨细胞的方法，为进一步的实验研究奠定基础。关键词：组织构建；骨组织构建；成骨细胞；原代培养；胶原酶消化法；组织块法；胶原酶；成骨细胞鉴定主题词：大鼠；颅骨；成骨细胞；细胞培养技术；细胞增殖；生长曲线表基金资助：东莞市医疗卫生重点课题(2012105102006)*；东莞市医疗卫生一般课题(201210515200001)*摘要背景：组织工程需要大量的种子细胞，成骨细胞是骨组织工程的重要种子细胞之一。但是成骨细胞培养难度大，不同培养方法得到的成骨细胞数量、纯度、增殖及分化活性各有区别。目的：验证及比较成骨细胞原代培养常用的3种方法，探索一种操作简便，既经济又高效的原代培养成骨细胞的方法，为进一步的实验研究奠定基础。方法：取新出生72h内SD大鼠乳鼠颅骨，以胶原酶消化法、分段胶原酶消化法及组织块法分离成骨细胞，进行细胞形态观察、细胞化学染色、CCK-8法绘制生长曲线及锥虫蓝排斥法计数活细胞率。结果与结论：分离培养的成骨细胞增殖良好，具备典型成骨细胞特性，细胞化学染色结果明显。胶原酶消化法比分段胶原酶消化法提取的成骨细胞数量多，细胞存活率高(P<0.05)；且比分段胶原酶消化法操作简单，耗时短。组织块法操作最为简单，对细胞损伤较小，但是细胞数量低、耗时长，很难用于大规模成骨细胞培养。胶原酶消化法是一种方便、高效、理想的原代成骨细胞分离培养方法。PrimarycultureandidentificationofneonatalratosteoblastsChengHao1,ZhangYan-fang1,XuWei2(1DepartmentofPhysics,SchoolofInformationEngineering,GuangdongMedicalCollege,Guangzhou523808,GuangdongProvince,China;2GuangxiWuzhouPharmaceutical(Group)Co.,Ltd.,Wuzhou543002,GuangxiZhuangAutonomousRegion,China)AbstractBACKGROUND:Tissueengineeringrequiresalotofseedcells.Osteoblastshavebecomeimportantseedcellsinbonetissueengineering.However,itisdifficulttoculturetheosteoblasts,andcellnumber,purity,proliferationanddifferentiationactivityaredifferentobtainedbydifferentculturemethods.OBJECTIVE:Toidentifyandcomparethreecommonprimaryosteoblatculturemethods,andto...
