噬菌体效价的测定VIP免费

实验九实验九噬菌体效价的测定噬菌体效价的测定目的要求目的要求11、掌握噬菌体效价测定的原理及方法、掌握噬菌体效价测定的原理及方法22、观察噬菌斑的形态、观察噬菌斑的形态实验内容一培养基和实验物品的准备本次实验准备工作（2人/组）1、配制牛肉膏蛋白胨液体培养液（（pH7.4-7.6pH7.4-7.6））；（已准备好）。2、测定效价时稀释用9ml牛肉膏蛋白胨液体培养液——2支/组，分装于18×180mm试管；3、牛肉膏蛋白胨固体培养基（2%的琼脂）——底层用，150ml/组，装于250ml三角瓶，（用于制备9个无菌平板，倒薄一点）4、上层用5ml牛肉膏蛋白胨半固体培养基（0.8%的琼脂），融化后分装于15×150mm试管中加塞包扎灭菌，10支/组；（上周已准备好）。5、1ml无菌吸管4支/组。实验内容二噬菌体知识介绍一、几个重要概念一、几个重要概念11、噬菌体：、噬菌体：是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒，分布极广，个体很小，微生物的病毒，分布极广，个体很小，在光学显微镜下看不见，需用电镜观察。在光学显微镜下看不见，需用电镜观察。不同的噬菌体在电镜下有三种形态：不同的噬菌体在电镜下有三种形态：蝌蝌蚪形、微球形和丝形蚪形、微球形和丝形。大多数噬菌体呈。大多数噬菌体呈蝌蚪形，由头部和尾部两部分组成。蝌蚪形，由头部和尾部两部分组成。22、噬菌斑：、噬菌斑：在混浊的细菌菌面（菌苔）上形成的在混浊的细菌菌面（菌苔）上形成的透明区域，是由噬菌体不断侵染宿主细透明区域，是由噬菌体不断侵染宿主细胞裂解形成的，其形状、大小不等。胞裂解形成的，其形状、大小不等。33、噬菌体效价：、噬菌体效价：指指1mL1mL样品中所含具有侵染活性的噬样品中所含具有侵染活性的噬菌体（烈性噬菌体）数量菌体（烈性噬菌体）数量————噬菌斑形噬菌斑形成单位（成单位（pfupfu，，plaque-formingunitplaque-formingunit）。）。效价（效价（titretitre，，titertiter）这一名词在不同的）这一名词在不同的场合有其不同的含义（如抗生素等）场合有其不同的含义（如抗生素等）。。二、病毒粒子的构造（模型）二、病毒粒子的构造（模型）噬菌体的形态及分类科属噬菌体的形态及分类科属大肠杆菌大肠杆菌T4T4噬菌体结构示意噬菌体结构示意图图大肠杆菌大肠杆菌T4T4噬菌体结构示意图噬菌体结构示意图及电镜照片及电镜照片头部六角形基板领环螺旋形尾鞘核心或管（中空）尾刺或刺突尾丝噬菌斑示意照片噬菌斑示意照片宿主细菌菌苔噬菌斑大肠杆菌大肠杆菌TT噬菌斑的表型形噬菌斑的表型形态态三、噬菌体的分类三、噬菌体的分类————根据噬菌体与宿主菌的相互关系根据噬菌体与宿主菌的相互关系烈性噬菌体（烈性噬菌体（virulentphagevirulentphage））能在宿主细胞内复制增殖，产生许多子代噬能在宿主细胞内复制增殖，产生许多子代噬菌体，并最终裂解细菌。菌体，并最终裂解细菌。温和噬菌体（温和噬菌体（temperatephagetemperatephage））噬菌体基因与宿主染色体整合，不产生子代噬菌体基因与宿主染色体整合，不产生子代噬菌体，但噬菌体噬菌体，但噬菌体DNADNA能随细菌能随细菌DNADNA复制，复制，并随细菌的分裂而传代，存在游离态、整合并随细菌的分裂而传代，存在游离态、整合态、营养态三种形式。态、营养态三种形式。针对温和噬菌体来说：前（原）噬菌体、针对温和噬菌体来说：前（原）噬菌体、溶源菌溶源菌四、噬菌体繁殖（生活周期）四、噬菌体繁殖（生活周期）11、吸附、吸附22、侵入、侵入33、增殖（生物合成）、增殖（生物合成）44、成熟装配、成熟装配55、裂解释放、裂解释放T4T4噬菌体吸附和噬菌体吸附和DNADNA的注入的注入TT偶数噬菌体感染大肠杆菌偶数噬菌体感染大肠杆菌的扫描电镜照片的扫描电镜照片T4T4噬菌体的生活周期噬菌体的生活周期T4T4噬菌体的装配噬菌体的装配五、噬菌体的应用五、噬菌体的应用11、细菌的鉴定与分型、细菌的鉴定与分型噬菌体与宿主菌的关系具有高度特异噬菌体与宿主菌的关系具有高度特异性，即一种噬菌体只能裂解一种和它相应性，即一种噬菌体只能裂解一种和它相应的细菌，故可用于未知细...