CELL-培养用液VIP专享VIP免费

教学目的:1、掌握细胞培养对水的要求。2、了解常用的平衡盐溶液的配制及使用方法。3、了解细胞培养常用液有那些。4、了解常用的培养液的种类。•Balancedsaltsolution,BSS•组成：无机盐、葡萄糖•作用：1、维持渗透压、保持pH值稳定、提供简单营养；2、湿润组织，防止组织块干涸，并能洗涤组织块上的血污、杂质；3、作为配制其它溶液的基础溶液（消化液：分散细胞；抗生素溶液；基础培养基等）一、平衡盐溶液（BSS）注意事项：1、配制平衡盐溶液需用三蒸水；2、D-Hanks与PBS不含Ca2+，Mg2+高压灭菌不容易出现沉淀，其它含有Ca2+，Mg2+的平衡盐溶液高压灭菌后易出现沉淀，应过滤使用；3、PBS与D-Hanks不含有Ca2+，Mg2+常用于配制胰蛋白酶溶液（Ca2+，Mg2+会降低胰酶活性）；4、Earle平衡盐溶液含有较高的NaHCO3，适合开放式培养；Hanks液含有较少的NaHCO3适合密闭式培养；5、配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温高压灭菌。用途：清洗材料、洗涤细胞、配制其他溶液。RingerPBSTyrodeEarleHank’sD-Hank’sDulbeccoＮaCl9.008.008.006.808.008.008.00KCl0.420.200.200.400.400.400.20CaCl20.25-0.200.200.14-0.10MgCl26H2O--0.10---0.10MgSO47H2O---0.200.20--Na2HPO4H2O-1.56--0.060.06-NaH2PO42H2O--0.050.14--1.42KH2PO4-0.20--0.060.060.20NaHCO3--1.002.200.350.35-葡萄糖--1.001.001.00--酚红---0.020.020.020.02常用的几种平衡盐溶液分类：按来源分：天然培养基人工合成培养基（基础培养基）按基质状态分：半固体:琼脂，明胶，血浆液体二、组织培养基92℃以上溶解46℃以下凝固思考题：细胞培养所用的培养基与微生物培养基有什么区别？生长液：基本培养基加入8%-10%的血清；维持液：基本培养基加入3%-5%的血清；完全培养基：人工合成培养基加上血清；基础培养基又叫做人工合成培养基。•Hank’s+水解乳蛋白（进口）基础培养基+血清（8%-10%）干粉培养基DMEM，RPM1640等基础培养基+血清（8%-10%）Hank’s+水解乳蛋白+干粉培养基+8%-10%血清3种常见的培养基一、培养基的基本要求（一）营养成分（二）促生长因子及激素（三）渗透压（四）pH（五）无毒无污染营养成分（1）氨基酸：细胞合成蛋白的原料包括：12种必需氨基酸和谷氨酰胺（2）单糖：六碳糖是最主要的能量来源（3）维生素：在细胞代谢过程中扮演辅酶、辅基的角色（4）无机离子及微量元素促生长因子及激素对于维持细胞的功能,保持细胞的形态具有十分重要的作用.如:胰岛素(insulin):能够促进细胞利用葡萄糖与氨基酸,对细胞的生长有促进作用.当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情况下，水分通过渗透流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩，这种情况会使DNA和蛋白遭到破坏、细胞周期停滞以及最终使细胞死亡。人血浆渗透压为290mOsm/Kg，可视为培养人体细胞的理想渗透压，相当于7倍的大气压。PH值•细胞生长的最适PH为7.2-7.4•密闭培养时长生的CO2与水结合能产生碳酸，培养基的PH值会很快下降，对细胞产生有害影响。•NaHCO3-CO2缓冲系统NaHCO3+H2ONa++H2O+OH-+CO2CO2稳定则上述反应平衡，PH值也相对恒定（二）天然培养基天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,常用的有血清、淋巴液、鸡胚浸出液及一些促贴壁的胶原成分等。优点：营养丰富，培养效果好。缺点：成分复杂；来源受限；批间有差异;易污染。血清最常用，重要！1.血清的主要作用1）提供基本的营养物质2）提供贴壁和扩展因子(FN)3）提供激素及各种生长因子4）提供结合蛋白，在细胞代谢中起作用5）对培养细胞提供某些保护作用（中和胰酶消化、保护细胞免受机械损伤、微量元素解毒）2.使用血清的缺点1）可能改变细胞在体内的正常状态：体内细胞不和血清直接接触，而体外培养时直接接触，使之偏离原始状态;2）有些物质对细胞产生毒性作用，如：补体，抗体，细菌毒素等;3）每批血清之间都有差别;4）取材过程有可能带入支原体、病毒，导致实验失败。3、种类：1）小牛血清（10～30D）2）新生牛血清（24H）3）胎牛血清品质最高4、鉴定内容：血清质量高低取决于：取材对象:...