血清总蛋白测定血清总蛋白测定双缩脲法双缩脲法实验目的实验目的•熟悉血清蛋白的测定方法（双缩脲法）。•掌握血清总蛋白测定的临床意义。•进一步巩固掌握721E型分光光度计的使用。实验原理实验原理•尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。•双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反映！•凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基（-CONH2-）均可呈双缩脲反映。实验试剂实验试剂•生理盐水：NaCl0.9g溶于100ml蒸馏水•双缩脲试剂：硫酸铜3.0g溶于500ml蒸馏水，加酒石酸钾钠9.0g,碘化钾5.0g，完全溶解后，加入24%NaOH100ml，用蒸馏水稀释到1L，置聚氯乙烯瓶内盖紧保存。•蛋白质标准液：收集混合血清，经凯氏定氮法定值，用作蛋白质标准液。贮于冰箱中备用。也可用100mg/ml牛血清白蛋白替代。•待测血清用生理盐水1:10稀释。实验操作实验操作•取3支试管，按下表操作。测定管标准管空白管血清（ml）蛋白质标准液（ml）生理盐水（ml）双缩脲试剂（ml）1.00——5.0—1.00—5.0——1.005.0•混匀，37℃水浴放置10分钟，以空白管调零点，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。•计算（P60）临床意义临床意义•血清蛋白升高•血清蛋白降低
