丹参对抑制膝关节骨性关节炎NO诱导软骨细胞凋亡及滑膜炎症的研究VIP免费

一、立项依据（包括国内外研究现状、发展趋势、理论与实践依据、研究目的意义等）骨性关节炎（OsteoarthritisOA）是一种慢性进行性软骨损伤的骨关节病，多发于老年人。随着社会人口老龄化的加剧，该病的发生越来越多，严重危害着老年人的健康。由于目前尚未弄清该病的病因及发病机理，所以临床上还缺乏有效的防治该病的药物及方法。业已证明，关节软骨的退变是OA的直接原因。自1993年Stefanovic阐述一氧化氮(NO)在关节软骨退变中的作用以来，NO在OA中的作用倍受关注，人们为此作了大量的研究工作。Palmer等[1]和Rediske等[2]报告软骨细胞是在关节内炎症递质诱导下产生NO的主要细胞。而Grabowski等[3]研究证实人类关节中的软骨母细胞在体外培养中并无N0产生，只要加入炎性细胞因子，如IL-lα、TNF-β、IFB-γ等，就会激活软骨母细胞中的iNOS而产生大量NO。iNOS在OA的发病过程中发挥着重要作用。目前已知一氧化氮合酶（NOS）按表达方式分为结构型(包括神经型和内皮型)和诱导型（iNOS）。NOS催化底物精氨酸产生NO[4]。iNOS在正常滑膜和软骨中没有表达，但在炎症刺激下被活化形成大量NO。彭丹等[5]研究发现实验性OA中NO水平显著高于正常对照组，且随病程延长，NO水平逐渐升高，6周达高峰，此时也出现较多软骨细胞凋亡现象，应用一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME后，关节液中NO含量降低，软骨细胞凋亡现象减轻，提示NO是引起实验性OA中软骨细胞凋亡的介质之一。高石军等[6]对OA患者关节软骨、滑膜血清及关节液中NO的测定显示其明显升高，且以软骨及滑膜中的含量最高，提示NO含量升高成为关节软骨退变和滑膜炎症的病因之一。而在另项研究中[7]发现，即使不加入IL-1或脂多糖等刺激物，OA患者软骨细胞在体外仍可产生大量的NO，体外培养发现：NO对软骨细胞功能有许多不利影响，包括抑制胶原和粘多糖的合成，促进细胞凋亡，以及抑制细胞外基质粘集。Francisco等[8]的体外实验发现，NO在软骨细胞凋亡中起重要作用，其他细胞词控因子如IL-l、TNF、LPS、氧自由基等均不能诱导软骨细胞凋亡。正常关节软骨细胞有少量的NO分泌，从而维持细胞-细胞间信息传递，拮抗氧自由基的氧化损害反应[9]。而骨关节炎患者关节内软骨组织在诸如滑液内低氧分压液、pH值降低、软骨缺血、细胞因子、创伤等多种病例因素刺激下，N0被过度的表达和调控，明显高于正常人。研究表明，高浓度N0可通过抑制软骨细胞增殖，促进软骨细胞凋亡，改变蛋白多糖和胶原蛋白的合成与分泌功能,抑制软骨细胞合成软骨基质,促进软骨细胞糖酵解,从而导致关节软骨修复能力降低,软骨破坏增加,加速软骨退变[10]。滑膜中丰富的血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等在炎性细胞因子的刺激下可产生大量的NO[11]。体外实验证明[12]，人类滑膜中的纤维母细胞在体外培养时无NO产生。当加入IL-1β、TNF-α等细胞因子后可活化其中的iNOS，产生大量的NO。滑膜中高含量的NO可引起滑膜组织的损伤和血管扩张，NO在损伤滑膜组织的同时，也损伤了其中的血管壁，使血管壁的通透性增大而引起渗出，导致滑膜肿胀、充血及关节内的少细胞渗出性关节积液。祖国医学认为OA属痹证范畴，认为肝肾亏虚为其内因，复加风寒湿邪侵袭及劳损外伤等外因，致使病变局部气血瘀滞，筋骨失养而发病，“风寒湿三气杂而为痹”(《素问·痹论》)，故主张“祛寒除湿”[13]。丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎。[14]，其性苦，微寒。归心、肝经。祛瘀止痛，活血通经，清心除烦。《千金方》、《证治准绳》、《普济方》等医书中均有丹参在方剂中或合用以治疗骨性关节炎的记载[15]。研究表明：丹参注射液对治疗骨性关节炎有临床疗效[16]，但没有阐明其具体的药理机制。本实验旨在通过细胞分子生物学的水平研究丹参的作用机理并进一步研究NO在OA中软骨退变过程的机理。此外，本实验还将研究不同的注射方式对临床疗效的影响。综上所述:NO在OA中具有重要的意义，但其在OA中所起的作用尚未完全明白。有研究表明，NO在破坏软骨的同时，在某种条件下还具有保护软骨的作用。因此，需进一步研究NO在OA中软骨退变过程的机理，并为iNOS特异性抑制剂的使用提供...