角膜及眼表疾病p27Kip1基因RNA干扰对牛角膜内皮细胞增殖的影响黄渝侃1张明昌1王勇2范可顺1张光红11华中科技大学附属协和医院眼科2武汉爱尔眼科医院【摘要】目的探讨针对细胞周期性激酶抑制剂p27Kip1的小发夹RNA(shRNA)表达质粒对牛角膜内皮细胞增殖能力的影响
方法设计有发夹状结构的三条p27Kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照
构建并鉴定重组质粒Pgenesil-P1、Pgenesil-P2,Pgenesil-P3和Pgenesil-HK
以脂质体法将4种重组质粒分别导入牛角膜内皮细胞
稳定转染后RT-PCR法和Westemblot法检测牛角膜内皮细胞内p27KiplmRNA及蛋白水平,筛选出抑制效果最好的阳性siRNA质粒
用MTT法检测该质粒组及对照组细胞生长情况
流式细胞术检测各组细胞周期的分布
结果酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功
与空白对照组比较,Pgenesil-P1、Pgenesil-P2,Pgenesil-P3各组mRNA及蛋白表达水平均受到抑制,尤以PgenesiI-P3抑制效果最明显
空白对照组与Pgenesil-HK无显著性差异
与空白对照及阴性siRNA相比,Pgenesil-P3组牛角膜内皮细胞生长增快,增殖能力增强,G1期细胞比例下降,S期比例增加
结论针对细胞周期性激酶抑制剂p27Kip1的shRNA可有效降低其的表达水平,并可使牛角膜内皮细胞增殖能力提高
RNA干扰介导的p27Kip1基因沉默可能是促进角膜内皮细胞再生的有效手段
角膜Q值的测量分析沈政伟商旭敏尹禾吴金桃李丽广州军区武汉总医院430070【摘要】目的研究中国人轻中度近视眼角膜Q值及其分布特点
方法采用Allegrettowavetopolyzer角膜地形图仪检测122例(244眼)轻中度近视眼角膜地形图,计算角