水温骤降后凡纳滨对虾血清中NO、NOS水平及对副溶血弧菌的敏感性[1]VIP专享VIP免费

第21卷第1期2006年3月大连水产学院学报JOURNALOFDALIANFISHERIESUNIVERSITYV01．21No．1M．20O6文章编号：1000—9957(2006)O1-OO46—05水温骤降后凡纳滨对虾血清中NO、NOS水平及对副溶血弧菌的敏感性朱宏友，王广军，余德光，谢骏(1．中国水产科学研究院珠江水产研究所，广州510380；2．_ktg*产大学生命科学与技术学院，上海200090)摘要：测定了水温骤降后(A组(25---,22~C)、B组(25—19~C)、c组(25—16~C)、对照组(25℃))6、24h凡纳滨对虾Penaeusvannamei血清中一氧化氮(NO)的浓度、一氧化氮合成酶(IIi-tricoxidesynthase，NOS)的活性以及溶菌酶活力的变化，并在水温变化后24h用副溶血弧菌Vibrioparahaemolytictts对对虾进行人工感染，以评价凡纳滨对虾对副溶血弧菌的敏感性。结果表明，水温骤降后6h，各试验组对虾血清中NO浓度、NOS活性、溶菌酶活力均与对照组差异不显著(P>O．05)。水温骤降后24h，B组对虾血清中NO浓度显著高于对照组(P<0．05)，A、c两组与对照组差异不显著(P>0．05)；B组对虾血清中NOS的活性显著高于对照组(P<0．05)，c组显著低于对照组(P<0．05)。A组与对照组差异不显著(P>0．05)；各试验组对虾血清中的溶菌酶活力与对照组差异不显著(P>0．05)；用副溶血弧菌人工感染对虾的死亡率c组为58．3％，与对照组(33．3％)存在显著差异(P<0．05)。这说明水温大幅度急剧下降后，凡纳滨对虾血清中的NOS活性、溶菌酶活力下降。因而导致凡纳滨对虾对副溶血弧菌的敏感性升高。关键词：凡纳滨对虾；水温变化；一氧化氮；一氧化氮合成酶中图分类号：Q945．4文献标识码：A对虾在养殖过程中可能会面临着多方面的环境胁迫(水质恶化、个体问的竞争、高密度拥挤、水温变化等)，由此而引发其机体的应激反应，这虽是一种保护性反应，但若长期处于应激状态下，对虾机体的免疫功能会受到抑制⋯。在免疫系统中，由一氧化氮合成酶(NOS)催化产生的一氧化氮(NO)在生物抵抗疾病和免疫调控方面具有非常重要的作用“】，并且NOS能够作为反映对虾健康状况的有效指标J。国内外有关环境胁迫对对虾免疫功能的影响已有报道、】，而水温骤降对对虾免疫功能方面的研究尚未见报道。作者以NO和NOS为指标，通过测定其在凡纳滨对虾Penaeus犯一namei体内的变化，来研究水温变化对对虾非特异性免疫功能的影响，以期为对虾的疾病预防提供科学依据。1材料与方法1．1试验材料试验用凡纳滨对虾体长为(12．23士1．22)cm，体重为(13．225：3．24)g，购于深圳市农科中心基地，于昼夜充气的水泥池中暂养1周，正常投喂饲料，选择健康的凡纳滨对虾进行试验。试验用溶壁微球菌冻干粉、NO和NOS检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所，副溶血弧菌m砌parahaemolyticus由珠江水产研究所鱼病室提供。收稿日期：2005-03-30基金项目：广东省自然科学基金资助项目(031818)(05011783)作者简介：朱宏友(1974一)，男。硕士。E-mail,zhuhyO423@163．c0In通讯作者：谢骏(1965一)。男，博士，研究员。E—mm：~joo7@tom．tom维普资讯http://www.cqvip.com第1期朱宏友，等：水温骤降后凡纳滨对虾血清中NO、NOS水平及对副溶血弧菌的敏感性471．2试验方法设置3个试验组的水温变化幅度分别为：A组(25--．22~C)、B组(25_+l9c【=)、c组(25_+16~C)，D组(25~C)为对照组。各梯度用海水冰块调节温度，每组设3个重复。试验在300L的塑料桶中进行，每桶放30只凡纳滨对虾。于试验后6、24h分别采集各组的样品。整个试验过程连续充气，正常投喂对虾配合饲料，试验期间盐度为30。1．3血清的制备用1mL一次性无菌注射器从对虾第四步足基部采集血淋巴，于冰箱(4~C)中过夜，在4~C下以4000r／min离心5rain，吸取上清液后两两混合，并置于冰箱(一20~C)中备用。24h后各组剩余对虾用于人工感染试验。1．4检测方法NO化学性质活泼，在生物体内代谢很快转化为NO；和NO：-，而NO；又进一步转化为NO；。因此可利用硝酸还原酶的特异性，将NO；还原为NO；，再通过显色深浅测定NO的浓度。NOS能催化L一精氨酸生成NO，生成的NO与亲核物质反应生成有色化合物，在530nm波长下测定其吸光度，根据吸光度大小计算NOS的活性。以溶壁微球菌冻干粉为底物，参照Hultmark等的方法，略有...