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提取和鉴定DNAVIP免费

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回忆:构成生物体的遗传物质是什么?回忆:构成生物体的遗传物质是什么?分别加入R型细菌转化为S型菌DNA多糖脂质蛋白质RNA怎样才能将细胞内的怎样才能将细胞内的DNADNA分离出来?分离出来?提取生物大分子的基本思路提取生物大分子的基本思路??选用一定的物理或化学方法选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。质的生物大分子。提取提取DNADNA的基本思路的基本思路??利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质等在、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取物理和化学性质方面的差异,提取DNADNA,去除其他成分。,去除其他成分。((11))DNADNA的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使能使DNADNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反。充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反。((11))DNADNA的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使能使DNADNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反。充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反。如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出?((22))DNADNA在酒精溶液中的溶解性在酒精溶液中的溶解性DNADNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理,物质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将可以将DNADNA与蛋白质进一步分离与蛋白质进一步分离((33))DNADNA对酶、高温的耐受性对酶、高温的耐受性①①蛋白酶能水解蛋白质,但是对蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNADNA没有影响没有影响②②大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受6060--80°C80°C的的高温,而高温,而DNADNA在在80°C80°C以上才会变性以上才会变性((33))DNADNA对洗涤剂的耐受对洗涤剂的耐受性性洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜,洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜,去除脂质和蛋白质去除脂质和蛋白质,,但对但对DNADNA没没有影响有影响(一)实验材料的选取(一)实验材料的选取材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取中选取22~~33种实验材料)种实验材料)什么材料适合提取DNA?凡是含有凡是含有DNADNA的生物材料都可以考的生物材料都可以考虑虑选用选用DNADNA含量相对较高的组织含量相对较高的组织从核DNA数目来看,猪38条,鸡78条,哺乳动物血0条,猕猴桃58条,洋葱16条,豌豆14条,菠菜12条,大肠杆菌1条。(二)破碎细胞,获取含(二)破碎细胞,获取含DNADNA的滤液的滤液1、动物细胞在鸡血细胞液中加入一定在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液棒搅拌,过滤后收集滤液即可即可2、植物细胞植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜(三)去除滤液中的杂质(三)去除滤液中的杂质————方案一方案一0.14mol/L冷酒精(三)去除滤液中的杂质(三)去除滤液中的杂质————方案二、三方案二、三方案二:30mL滤液+嫩肉粉→静置10~15分钟→DNA滤液方案三:30滤液→60~75℃处理→过滤获得DNA滤液(四)(四)DNADNA的鉴定的鉴定⑴⑴向两支试管中分别加向两支试管中分别加入入2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液溶液5ml5ml⑵⑵其中一支试管中加入其中一支试管中加入DNADNA丝状物丝状物⑶⑶各加入各加入二苯胺二苯胺试剂试剂4ml4ml⑷⑷混匀后,置于沸水浴混匀后,置于沸水浴中加热中加热5min5min⑸⑸待冷却后,比较两只待冷却后,比较两只试管中溶液的颜色变化试管中溶液的颜色变化(五)实验结果的评价(五)实验结果的评价5.15.1如何知道是否提取出了如何知...

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