www.100biotech.comservice@100biotech.com实验一、显微镜的使用与维护一、显微镜的组成(仿Olympus)1.机械部分镜头转换器;粗、细准焦螺旋;载物台;刻度尺;镜臂;镜座2.光学部分(1)放大系统物镜(三个);目镜;镜筒放大倍数=目镜倍数×物镜倍数(2)集光系统光栅;聚光镜;反光镜;开关二、使用1.开关:动作要轻、慢,不使用时要及时关闭。2.调焦距:先用粗准焦螺旋,再用细准焦螺旋。3.安指针:加拿大树胶、头发4.观察:低倍镜®高倍镜三、维护工作1.擦镜头时,用双层镜头纸对折,从中间向周围擦,不能用滤纸或其它物品代替镜头纸。每次实验完毕,镜身要用纱布擦干净。清洗液(1)乙醚:无水乙醇=85:15(冬春季)或80:20(夏秋季)(2)二甲苯2.载物台上的载玻片和盖玻片要清洁,切勿污染物镜或其它部件。3.显微镜不可上锁,如不小心会损伤粗、细准焦螺旋。4.由低倍向高倍转换时,可稍微下降载物台,以免损伤显微镜。5.存放时,将载物台降到最低点,并把镜头移开。所需材料及药品接线板、乙醚:无水乙醇=80:20、牙签、加拿大树胶、镜头纸第一大实验细胞学实验实验一、细胞固定、染色原理与方法一、固定与固定液(一)固定:将新鲜的活组织从生物体取下后,立即投入固定剂中,借助化学药品的作用,使细胞保持原有形态、结构的一种手段。www.100biotech.comservice@100biotech.com1.目的(1)迅速防止细胞死亡后的变化,防止自溶、腐败,尽量保持生长状态结构。(2)使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质,以保持生前的形态。(3)使组织内各种物质成分产生不同的折光率,便于观察和鉴定。(4)使不同组织成分对染料有不同的亲和力,便于染色。(5)防止细胞过度收缩或膨胀,失去原有的形态结构。2.时期(1)有丝分裂:有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织,根尖取材容易,操作和鉴定方便。(2)减数分裂:选取适当大小的花蕾是观察花粉母细胞减数分裂的关键性的第一步。此时的植株形态及花蕾大小依植物的类别及品种有所不同。小麦:在植株开始挑旗,旗叶与下一叶的叶耳间距为3-4cm,花药长度大致在1-2mm左右,黄绿色时取材最好。如花药为绿色时则为时过早,花药为黄色,则已过时。一般上午8-10点为取材最佳时间。玉米:一般夏玉米在7月份取材,以上午7-8点为好。在玉米雌穗未抽出前的7-10天手摸植株上部(喇叭口下部)有松软感觉,表明雄花序即将抽出。用刀在顶叶近喇叭口处纵向划一刀,切口长10-15cm,剥出雄花序,顶端花药长3-5mm,花药尚未变黄时取材。蚕豆:从现蕾开始,上午10-11点可选取2-3mm大小的花蕾或一小段花序。蚕豆开花的次序是由下而上,由外而内。3.固定时的注意事项(1)固定液量:20倍于材料的体积,以免固定液被稀释。(2)选择合适的固定液:渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中,又不使组织过度收缩或膨胀。(3)固定的时间要合适:与材料的大小和温度有关:材料大则时间长,材料小则时间短;温度高则时间短,温度低则时间长。经固定的材料如不及时使用,可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时,再换入一次70%酒精,在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次,效果较好。(二)固定液固定液包括简单固定液和混合固定液两种。简单固定液就是用一种药品作为固定液,如乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞等。简单固定液只对细胞的某种成分固定效果较好,而不能将所有的成分都保存下来。混合固定液是指两种或两种以上的化学物质的混合液,如卡诺氏固定液等。1.固定液的条件(1)迅速渗入组织,杀死原生质。在杀死的短时期中,细胞形态不致有所变化。(2)必须具有渗透力,对组织各部分的渗透力相等,可使组织内外完全固定。(3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。(4)使细胞内的成分凝固或沉淀。(5)增加细胞内含物的折光程度,易于鉴别。(6)增加媒染作用和染色能力。(7)使组织变硬,具有一定的硬度。(8)固定以后能起到保存的作用。www.100biotech.comservice@100biotech.com(9)在凝固原生质以后,增加细胞对于各种穿透的抵抗力,不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。2.常用的几种固定液(1)酒精:有固定、硬化和脱水的作用。可以固定...