苏州大学学报(医学艋)2@02；22(2)141兔眼角膜、结膜成纤维细胞的培养张晓峰盛伟华杨吉成(苏州大学生物技术系，苏|州215007)摘要：目的建立眼角膜、结膜细胞体外培养的方法。方法采用组织块培养法培养免眼角膜基质及结膜成纤维细胞。结果结膜成纤维细胞在培养l0天以后可形成单层细胞。眼角膜成纤维细胞在培养瓶中培养2周后可形成单层；24孔板培养3d后细胞贴壁生长旺盛，10d形成单层。结论眼角膜、结膜成纤维细胞组织块培养法是可行的，但在24孔培养板上眼角膜成纤维细胞比在培养瓶中贴壁快而且容易生长。关键词：角膜；结膜；成纤维细胞；细胞培养中宙分类号：R318；Q81311文献标识码：A文章编号：1000—5749(2002)02—0141—03RabbitEyeCornealandConjunctivalFibroblastCultureZ~．NGXi∞一ng，SHENGWei—huaYANGJi—cheng(DepartmentofBiotechnology，SuzhouUniversity，Suzhou215006，China)Abstract：0bjectToinvestigatetheculturetechniqueforcornealandconjunetivalfibmblast．MethodsThecornealandconjunctivalfibmblastforrabbitsrereculturedbytissueculture．ResultThetoniunetiva1fibmblastofrabbitformedamonolayerandhadafibriformarragementafterlOdcu1．ture．Thecornea1fibmblastofrabbitformedamonolayerandhadafibriformarragementaftertwoweekscultureincultureflasks．Thecellsgrewverywellin24一wel1cultureplatefor3dayscultureandhadafibriformarragementafter10dculture．ConclusionTWOkindsofeyecellsfromrabbitGallbeculturedsuccessfully．ItiseasiertOculturecornea1fibroblastin24一wel1platethaninflask．Keywords：cornea；COTliunctive；fibroblast；cellculture眼角膜、结膜细胞的体外培养是现代眼表疾病基础研究的重要方法之一。它对研究眼角膜、结膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，被很多实验室用于细胞代谢产物、病毒感染、细胞分化、各种生长因子和药物对细胞生长的影响等研究【1q】。角膜、结膜成纤维细胞在角膜、结膜创伤愈合过程中处于主导地位，了解它们的生长情况以及药物对成纤维细胞生长的影响具有重要的临床应用价值。同时，眼角膜、结膜成纤维细胞是构成角膜、结膜基质的主体，叉与各种眼角结膜疾病密切相关。为此，我们进行了兔眼角膜、结膜成纤维细胞的培养，现将结果报告如下。1材料与方法ll材料健康新西兰大白兔3只(由苏州大学生命科学学院实验动物中心提供)，体重2～25kg，雌雄不限。培养基用含20％小牛血清的RPMI1640100ml，内含终浓度为10U／L青霉素和链霉素。1．2方法12．1取材实验动物空气栓塞处死后立即在无菌条件下剪下4ram×4mm太小眼球结膜2块。穿刺刀沿角巩缘内lmm处切穿角膜，用剪刀剪下角膜片。组织片取下后均用高浓度抗生素(4×10U／L)无钙、镁PBS漂洗数次。1．22眼结膜成纤维细胞组织块培养将眼结膜组织块用眼科手术剪剪碎，放入预先用小牛血清处理的玻璃细胞瓶中，加入少量培养基使液体刚好浸没组织块。细胞瓶于5％CO2、37℃培养箱内培养。每日观察pH，细胞贴壁、伸展及分裂增殖、延伸扩展状态和细胞形态。1．2．3眼角膜成纤维细胞组织块培养用手术刀片刮除眼角膜上皮和内皮层，将残留角膜组织块切收稿日期：2001—12—15作者简升：张晓~(t97o一)，男．苏州^，苏州大学附一院眼科主洽医师，现为在职硬士研究生*导师维普资讯http://www.cqvip.com142SUZHOUUNIVERSITYJOURNALOFMEDICALSCIENCE2002：22(2)成2mm×2mm大小。分别放入预先用小牛血清处理的玻璃细胞瓶和24孔塑料培养板，加入少量细胞培养液使之刚浸没组织块，于5％c()，、37℃培养箱内培养。每日观察贴壁、伸展、细胞生长情况。在24孔板培养时每孔1～2块组织块。1．24细胞传代当结膜和角膜成纤维细胞分裂增殖延伸扩展至基本单层时进行传代。传代时弃原培养液，加入025％胰蛋白酶作用5min后弃上清液，将培养瓶置5％CO2、37℃培养箱内5min，倒置显微镜下可见贴壁细胞从培养瓶上呈片状脱落、细胞形态回缩成圆形，加入小牛血清终止消化。细胞经吹打分散后按照1：2分瓶传代。2结果2．1组织块培养法眼结膜成纤维细胞生长情况眼...
