实训二__MS培养基的配制与灭菌VIP免费

实训二MS培养基的配制与灭菌（3学时）一、目的要求通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。二、仪器与用具1、仪器：酸度计或pH试纸、电磁搅拌器、电炉2、用具：高压灭菌锅、微量移液器、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶（三角瓶）、烧杯、标签3、试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸馏水、0.1N、0.5NNaOH，0.1N、0.5NHCl三、方法步骤（一）MS固体培养基的配制1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。2、取少量的蒸馏水（约为配制培养基量的2/3）加入烧杯中。注意：配500ml培养基用1000ml烧杯。3、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。如配制1000ml培养基：需：MS大量元素母液100mlMS微量元素母液10mlMS铁盐母液10mlMS有机物母液10ml4、通过计算，用微量移液器取所需的各种生长调节剂母液。5、加入蔗糖（30g/L），溶解。6、定容：用容量瓶。7、调pH值：一般pH=5.8。用0.1N和0.5N的NaOH和HCl将pH调至所需的数值。注意：①经高温高压灭菌后，培养基的pH值会下降0.2—0.8，故调整后的pH值应高于目标pH值0.5个单位。②pH值的大小会影响琼脂的凝固能力，一般当pH大于6.0时，培养基将会变硬；低于5.0时，琼脂就不能很好地凝固。③如果pH值与所需的数值相差很大，可先用0.5N的NaOH或HCl调节，至接近时，再用0.1N的酸、碱调节。以免加入过量的水溶液，导致溶液体积增大，培养基不能很好地凝固（因加入的琼脂量一定）。8、分装到大三角瓶中（500ml、1000ml）。9、加琼脂（6-10g/L）。常用6.6--7g/L10、封口：用棉塞或锡箔纸、牛皮纸。注明培养基名称、配制时间。或者：5、加入蔗糖。6、加琼脂，煮沸1-2分钟（熔化琼脂）。7、定容，pH值。8、分注到培养瓶中。100-150ml培养瓶每瓶装入20-35ml左右的培养基。（二）MS固体培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）1、洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。自然晾干或烘箱干燥。2、包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。3、装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。（切忌干烧！）4、装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金属器械等。5、灭菌：将排气阀开着，加热，直至锅内释放出大量水蒸气（此时水蒸气横向喷出），再关闭阀们；或者当锅内压力升至49.0KPa时，开启排气阀，将锅内的冷空气全部排出。当锅内压力达到108KPa时，温度为121℃时，维持15-20分钟，即可达到灭菌的目的。（若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。）切断电源，让灭菌锅自然冷却。注意：①先打开放气阀，再打开锅盖。（以免锅内压力大而爆炸！）②开盖后应尽快转移培养瓶，使培养瓶冷却、凝固。一般应将灭菌后的培养瓶储藏于30℃以下的室内，最好储藏在4-10℃的条件下。③某些生长调节剂如IAA、ZT、ABA等以及某些维生素遇热是不稳定的，不能同培养基一起高压灭菌，而需要进行过滤灭菌。四、作业1、将本次实训内容写成实训报告。2、高压灭菌时应注意哪些问题？3、配制培养基时应注意哪些问题？[编辑本段]MS培养基的配制步骤这样每次使用时，取其总量的1/20(50mL)或1/200(5mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元素(母液Ⅰ)mg／LNH4NO333000KNO338000CaCl2·2H2O8800MgSO4·7H2O7400KH2PO43400微量元素(母液Ⅱ)KI166H3BO31240MnSO4·4H2O4460ZnSO4·7H2O1720Na2MoO4·2H2O50CuSO4·5H2O5CoCl2·6H2O5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O5560Na2-EDTA·2H2O7460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6)100盐酸硫胺素(维生素B1)100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1L。母液Ⅲ的配制方法是...