H7在脑损伤后血脑屏障损害中的作用2010-01-15李良平徐如祥王清华杨志林摘要：目的探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7在脑损伤后血脑屏障损害中的作用。方法雄性SD大鼠48只，随机分为正常对照组、假手术组、脑损伤组和治疗组。治疗组于大鼠脑损伤后0.5小时腹腔注射PKC抑制H7(1mg/kg),12小时重复注射1次，伤后24小时应用分光光度计定量检测伊文氏兰渗出。结果脑损伤后伊文氏兰明显渗出，治疗组渗出明显减少。结论应用PKC抑制剂H7能明显阻止血脑屏障开放，可望在血脑屏障保护作用中提供新的治疗措施。关键词：脑损伤；血脑屏障；信号转导中图分类号：R651.102文献标识码：A文章编号：1009-4237(2000)04-0210-03EffectsofH7onblood-brainbarrierdamageinbraininjuryLILiang-ping,XURu-xiang,WANGQing-hua,etal.(DepartmentofNeurosurgery,ZhujiangHospital,FirstMilitaryMedicalUniversity,Guangzhou510282)Abstract:ObjectiveToexploretheeffectsofH7,aproteinkinaseC(PKC)inhibitor,onBBBdamageinbraininjury.MethodsForty-eightmaleSDratsweredevidedinto4groups:controlone,sham-operationone,braininjuryoneandH7-treatmentone.TheratsofthetreatmentgroupwereperitoneallyadministeredH7(1mg/kg)0.5hafterbraininjuryanddidthesame12hafterbraininjury.ThepermeationofEvansbluewasobservedquantitativelywithaspectrophotometer.ResultsEvansbluewassignificantlypermeatedintheinjuredgroupwhileinsignificantlyintheH7-treatedrats.ConclusionH7canpreventBBBopening,whichmayprovideanewwayinBBBprotection.Keywords:braininjury;blood-brainbarrier;signaltransduction细胞内蛋白激酶C(PKC)激活可导致细胞通透性增加，脑微血管内皮细胞的PKC激活可导致血脑屏障的开放，脑水肿形成。研究脑损伤后PKC的信息转导通路可阐明血脑屏障损害的机理。本研究采用伊文氏兰定量观察，探讨PKC抑制剂H7在脑损伤后血脑屏障损害中的作用。材料与方法1实验分组雄性SD大鼠48只，体重(250±30)g，随机分为正常对照组、假手术组、脑损伤组和H7治疗组，每组12只。治疗组于伤后0.5小时腹腔注射H7(1mg/kg)，12小时后重复注射1次，H7的剂量选择参照Joo的方法［1］。动物均于伤后24小时处死。2脑损伤模型的建立采用改进的Feeney氏［2］自由落体硬膜外撞击方法。实验动物用10%水合氯醛(0.35g/kg体重)腹腔内注射麻醉后，头部固定于立体定向仪上，剪去顶部皮毛，消毒皮肤后，沿中线左侧切开头皮，分离骨膜，用牙科钻于中线旁2mm处，紧挨冠状缝后开一直径5mm的圆形窗，硬膜保持完整。用20g砝码于30cm高处通过一金属导杆坠落，撞击置于硬膜上的5mm直径的圆形锥上制成脑损伤模型，致伤冲击力为600gcm，硬膜外置明胶海绵止血，骨窗用锌汀粉封闭，缝合头皮，置鼠笼畏养。正常对照组不做任何处理。假手术组仅切开头皮和颅骨开窗，不致脑损伤，术后24小时处死。3脑组织伊文氏兰含量的测定大鼠均于处死前1小时股静脉注射2%伊文氏兰3ml/kg。取脑时，为清除血液中染料，用生理盐水左心室灌注至右心耳流出清亮液体。取损伤侧皮质、海马，对侧皮质、海马分别称重，加入二倍体积二甲基甲酰胺，50°C水浴中孵育72小时，1500g离心10分钟，取上清，应用分光光度计在伊文氏兰最大吸收光谱635nm处检测吸光度，从标准曲线上查得伊文氏兰含量结果以μg/g脑组织表示。4统计学处理应用单因素方差分析和各组均数t检验处理，P＜0.05为显著性差异。结果脑组织伊文氏兰定量测定结果：脑损伤后损伤侧皮质、海马，对侧皮质、海马伊文氏兰含量都明显高于正常对照组和假手术组。治疗组损伤侧海马、对侧皮质、海马，伊文氏兰含量接近正常，损伤侧皮质伊文氏兰含量明显高于正常对照组和假手术组，但明显低于脑损伤组(见附表、附图)。附表H7治疗后脑组织伊文氏兰含量的变化(±s)组别n伊文氏兰含量(μg/g脑组织)左侧皮质右侧皮质左侧海马右侧海马正常对照组1210.15±1.0610.31±1.2210.62±0.8911.67±0.84假手术组1210.96±0.4310.87±0.3710.61±0.6610.55±0.49脑损伤组12237.41±15.48**20.97±0.3820.38±0.79**15.67±1.19*H7治疗组1275.64±...
