课题2-多聚酶链式反应扩增DNA片段VIP免费

课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段吴江区平望中学俞红成DNA指纹法在案件侦破中有重要作用，刑侦人员通过案发现场的血液、头发等样品中提取的DNA，与犯罪嫌疑人的DNA进行比较，就由可能为案件的侦破提供证据。讨论：1.犯罪嫌疑人留在现场的样品一般都是极少量的，刑侦人员要怎样才能得到足够量的DNA呢？2.你还能说出DNA鉴定技术在其他方面的应用吗？★★分子生物学研究中最强大的实验技术之一分子生物学研究中最强大的实验技术之一★★其本质是在体外模拟细胞内其本质是在体外模拟细胞内DNADNA分子复制的过程分子复制的过程美国科学家穆利斯美国科学家穆利斯(K.B.Mullis)(K.B.Mullis)发明了发明了PCRPCR技术技术19931993年诺贝尔奖年诺贝尔奖DNADNA分子的平面结构分子的平面结构ATGCAGCT氢氢键键5'端3'端5'端3'端识别：-OH端为3′;磷酸基团的末端为5′。（（11））DNADNA分子是由分子是由的（即的（即一条链为一条链为3’3’－－5’5’，另一条链为，另一条链为5’5’－－3’3’）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则结构。结构。4.4.DNADNA双螺旋结构特点：双螺旋结构特点：（（22））与与交替连结，排列在外交替连结，排列在外侧，构成侧，构成基本骨架基本骨架；；排列在链的内侧。排列在链的内侧。（（33）两条链上的碱基通过）两条链上的碱基通过连结起来，连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤（即腺嘌呤（AA）一定与）一定与配对，配对，鸟嘌呤（鸟嘌呤（GG）一定同）一定同配对。配对。两条反向平行两条反向平行双螺旋双螺旋脱氧核糖脱氧核糖磷酸磷酸碱基碱基氢键氢键胸腺嘧啶（胸腺嘧啶（TT））胞嘧啶（胞嘧啶（CC））（二）（二）DNADNA的复制：的复制：1.1.概念：概念：由一个由一个DNADNA形成两个完全相同的形成两个完全相同的DNADNA的过程。的过程。2.2.时期：时期：有丝分裂间期，减数第一次分裂前的间期。有丝分裂间期，减数第一次分裂前的间期。3.3.场所：场所：细胞核（主要）、线粒体、叶绿体细胞核（主要）、线粒体、叶绿体4.4.基本条件：基本条件：酶酶::解旋酶、解旋酶、DNADNA聚合酶聚合酶能量能量:ATP:ATP原料原料::四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸模板模板:DNA:DNA的两条链的两条链5.5.复制特点：复制特点：a.a.边解旋边复制边解旋边复制b.b.半保留复制半保留复制6.6.遵循原则：遵循原则：碱基互补配对原则碱基互补配对原则7.7.精确复制的原因精确复制的原因a.a.规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板b.b.碱基互补配对保证了复制准确无误的进行碱基互补配对保证了复制准确无误的进行8.8.复制的意义复制的意义::DNADNA分子通过复制将遗传信息从亲代传给了分子通过复制将遗传信息从亲代传给了后代，保持了遗传信息的连续性。后代，保持了遗传信息的连续性。参与的组分参与的组分在在DNADNA复制中的作用复制中的作用解旋酶解旋酶DNADNA母链母链44种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸DNADNA聚合酶聚合酶引物引物总结：细胞内总结：细胞内DNADNA复制的基本体系复制的基本体系打开打开DNADNA双链双链提供提供DNADNA复制的模板复制的模板合成子链的原料合成子链的原料催化合成催化合成DNADNA子链子链使使DNADNA聚合酶能够从引物的聚合酶能够从引物的3’3’端开始连接脱氧核苷酸端开始连接脱氧核苷酸解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打开DNA双链模板合成子链的原料催化子链合成使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸思考：体外扩增DNA时，如何提供与体内DNA复制相似条件？变性（80～100℃）TaqDNA聚合酶（耐高温）20～30个核苷酸构成DNA或RNA二、二、PCRPCR（多聚酶链式反应）（多聚酶链式反应）（一）（一）PCRPCR原理原理DNA双链变性（加热95℃）复性（缓慢冷却）DNA单链变性的目的：解开双链复性的目的：有利于引物1和引物2与两条单链的结合PCRPCR扩增仪扩增仪PCR扩增仪实际上就是一台能够自动调控温度的仪器，它可以根据DNA的热变性原理，通过自动改变温度，达到扩增DNA片段的目的。1234522557294时间（min）温度（℃）适...