DNA的粗提取与鉴定VIP专享VIP免费

DNA的粗提取与鉴定一、实验原理1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。DNA在物质的量浓度为0.14mol／L的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。3.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。二、方法与过程1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。2.提取DNA。①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。③原理：血细胞的细胞膜、核摸吸水胀破，玻璃棒快速搅拌，机械加速血细胞破裂。⑴.提取血细胞核物质：⑵.溶解核内的DNA：滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。⑶.析出含DNA的粘稠物：⑷.滤取含DNA的粘稠物：⑸.DNA粘稠物的再溶解：在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。20mL2mol/L的NaCl溶液步骤⑷含DNA的粘稠物在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。⑹.过滤含有DNA的NaCl溶液：用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中含有DNA。⑺.提取含有杂质较少的DNA：步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。3.DNA的鉴定：加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”三、实验小结四、实验原理拓展介绍。1.DNA的释放。DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。2.DNA与蛋白质分离。在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解，析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中3.DNA的析出与获取。因为DNA在低浓度（0.14mol/L）的氯化钠溶液中溶解度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。4.DNA的再溶解。用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。5.DNA的沉淀和浓缩。对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na＋的DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物，悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒（玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。6.DNA的鉴定。100℃DNA＋二苯胺蓝色物鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。方法步骤加入物质目的1.制备鸡血细胞液柠檬酸钠溶液①2.提取鸡血细胞细胞核物质20m1蒸馏水②3.溶解细胞核内的DNA2m1／L的NaCI溶液40mL③4.析出含DNA的黏稠物蒸馏水④5.滤取含DNA的黏稠物⑤6.将DNA的黏稠物再溶解2mol／L的NaCl溶液20mL⑥7.过滤含DNA的NaCl溶液⑦8.提取含有杂质较少的DNA冷却的95％的酒精50mL⑧A:(1)向试管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL(2)加入DNA(3)4mL二苯胺试剂9.DNA的鉴定B:(1)向试管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL(2)4mL二苯胺试剂⑨①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固②加速血细胞破裂③溶解DNA④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上⑥使含DNA的黏稠物尽可能多...