专题1§1.2基因工程的基本操作程序（2课时）基因工程的基本操作程序主要包括4个步骤：的获取、基因表达的构建、将细胞、的检测与鉴定。一、目的基因的获取1、概念：目的基因主要是指编码蛋白质的。也可以是一些具有调控作用的因子。2、来源：（1）可以从自然界中已有中直接分离出来。（2）从中获取目的基因。3、基因文库：（1）概念：将含有某种生物不同基因的许多片段导入受体菌的群体中今夏，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。（2）种类：基因组文库――含有一种生物的。cDNA文库――含有一种生物的。4、获取目的基因的方法：根据基因的有关信息，如基因的序列，基因功能、基因在上的位置、基因的转录产物，以及基因的翻译产物等特性来获取目的基因。（1）利用PCR技术扩增目的基因：①PCR技术是一项在生物体外复制片段的核酸合成技术。②条件：提供已知的核苷酸序列，根据这段序列合成。③过程：目的基因DNA变性形成DNA单链，与结合，然后在的作用下延伸形成DNA。④方式：扩增，即2n(n为扩增循环次数)。（2）人工合成方法：当基因较小，核苷酸序列已知时，可以用人工方法合成（例如，通过直接合成）。二、基因表达载体的构建1、表达载体的组成表达载体：目的基因、、、标记基因。启动子：它是一段有，位于基因的首端，它是的识别和结合部位，起动转录mRNA。终止子：位于基因的尾端，终止过程。标记基因：用于受体细胞是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。2、表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中存在，并且给下一代，同时使能够表达和发挥作用。三、将目的基因导入受体细胞11、将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌转化法：①转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为。②农杆菌特点：在自然条件下能感染植物和植物，，对植物没有感染力；Ti质粒的可以转移至受体细胞，并整合到受体细胞的上。（2）基因枪法又叫。（3）花粉管通道法：利用花粉管通道使目的基因进入，然后进入。2、将目的基因导入动物细胞（1）方法：。（2）操作程序：目的基因的提纯→取卵（受精卵）→→移植子宫内发育→新性状动物3、将目的基因导入微生物细胞（1）原核生物的特点：，。（2）常用的受体细胞：。（3）转化：处理细胞→细胞→表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收分子，完成转化。四、目的基因的检测与测定1、检测：（1）方法：。（2）原理：碱基互补配对（3）内容：①检测转基因生物的染色体DNA上的，原理是技术。②检测目的基因是否转录出，原理是技术。③检测目的基因是否翻译成蛋白质，原理是。2、鉴定：个体生物学水平鉴定，如抗虫、抗病鉴定等。2
