5.1-DNA的粗提取与鉴定VIP免费

§5.1DNA§5.1DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定怎样才能将细胞内的DNA，也就是遗传物质分离出来？讨论1：在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低;在0.14mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L〖思考1〗DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？基础知识2mol/L浓度可使DNA溶解；0.14mol/L浓度可使DNA析出。基础知识0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L〖思考2〗要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？将DNA和蛋白质进一步分离〖思考3〗酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。问：采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？基础知识DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质，但对DNA没有影响蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。基础知识〖思考4〗提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。②能否使用甲基绿（绿色）鉴定DNA？DNA的鉴定通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。原理总结哺乳动物血液和液体培养基中大肠杆菌。（一）实验材料的选取不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？实验设计鸡血、猕猴桃。（一）实验材料的选取从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。实验设计动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1.动物细胞讨论为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA。①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜2.植物细胞讨论加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜2.植物细胞②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液讨论如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质讨论此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。方案方案一：30mL滤液＋35gNaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白酶）→静置10～15分钟→DNA滤液方案三：30mL滤液→60～67℃处理→过滤获得DNA滤液讨论方案二与方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。1.DNA的析出在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置2～3分钟，析出的白色丝状物就是DNA。DNA呈白色。（四）DNA的析出与...