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课题1菊花的组织培养一、基础知识1.细胞分化概念：植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因选择性表达的结果。●细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。2.细胞全能性已经分化的细胞。所具有发育成完整个体的潜能，即每个生物细胞都具有全能性，因为含有全套遗传信息.（细胞全能性是组织培养的基本原理）。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。3、植物组织培养离体的植物组织或细胞（又叫外植体），在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。植物组织培养的基本过程注意：①脱分化：指已经分化的植物器官、组织或细胞,当受到创伤或进行离体(也受到创伤)培养时,已停止分裂的细胞,又重新恢复分裂,细胞改变原有的分化状态,失去原有结构和功能,成为具有未分化特性的细胞。②植物组织培养必要条件：细胞离体;一定的营养物质、激素和其他外界条件。●影响植物组织培养的因素1.内部因素：植物材料的选择直接关系到试验的成败。植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。烟草和胡萝卜的组织培养较为容易。枸杞愈伤组织的芽诱导比较难。离体的植物组织、器官或细胞组织培养脱分化愈伤组织组织培养再分化根、芽等器官人为使用植物激素控制同种植物材料，年龄、保存时间的长短等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝。一般来说，容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。2.外部因素：（1）营养条件：离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件的要求相对特殊，需要配制适宜的培养基。常用的是MS培养基，其主要成分包括：大量元素，如N、P、S、K、Ca、Mg；微量元素，如Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co；有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。（2）植物激素：植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强趋势。在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。（3）环境因素：PH、温度、光等条件也能影响植物组织培养。不同的植物对各种条件的要求往往不同。菊花组织培养，一般PH控制在5.8左右；温度控制在18~22℃；每天用日光灯照射12小时。三、实验操作过程1.制备MS固体培养基实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备（1）配制各种母液。配制母液时，大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。并加蒸馏水稀释。（2）配制培养基。配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸馏水，加热熔化，然后加入蔗糖30g,依次加入母液，定容至1000mL。调PH，然后分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素有利于分裂但不分化先细胞分裂素，后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高生长素／细胞分裂素比值与结果比值高时促根分化，抑芽形成比值低时促芽分化，抑根形成比值适中促进愈伤组织生长100ml。·在菊花组织培养中，可以不添加植物激素。原因是菊花茎段组织培养比较容易。（3）灭菌。高压蒸汽灭菌■MS培养基中各种营养物质的作用是什么？与肉汤培养基相比，MS培养基有哪些特点？大量元素和微...