克霉唑药膜微生物限度检查方法的验证试验研究【关键词】 克霉唑； 薄膜过滤法； 抑菌活性克霉唑（Clotrimazole）药膜作为阴道局部外用制剂，中国药典 2005（CP2005）年版二部对受微生物污染的微生物限度有明确要求，对具有抗菌活性的药品进行微生物限度检查，首先应排除抗菌活性，经验证试验来确认其抑菌活性是否去除而不影响检验结果，保证检验结果的准确性。2007 年 11 月~2008 年2 月为建立克霉唑药膜微生物限度检查方法，参考中国药典，以试验菌的回收测定为主要方法，测定克霉唑膜制剂在微生物限度检查条件下对细菌、霉菌、酵母菌的代表菌的抑菌活性，并进行方法选择试验［1，2］；对筛选出的敏感菌选择用离心沉淀与薄膜过滤法联用消除其抑菌活性，经选择试验确定供试液浓度及冲洗条件，按筛选出的方法作 3 个批号计数方法的验证，对方法进行评价［3］；对控制菌检查方法进行了验证试验研究，建立克霉唑药膜的微生物限度检查方法。 1 实验材料及仪器 1.1 仪器与样品 ＨＴＹ-2000 型智能集菌仪、多次使用集菌器、一次性薄膜过滤器（杭州泰林生物技术设备有限公司）、离心机（800 型沉淀离心机，上海手术器械十厂）、高压蒸汽灭菌器、电子天平、生物安全柜、生化培养箱等。克霉唑药膜 （ 规格：4mg，贵州德轩堂制药有限公司生产批号：051225、051226、051227）。 1.2 培养基、稀释剂及试剂 营养琼脂、营养肉汤、玫瑰红钠琼脂、改良马丁培养基、胆盐乳糖增菌培养基、溴化十六烷基三甲胺琼脂、亚碲酸盐肉汤、甘露醇氯化钠琼脂、0.9%氯化钠溶液、pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（中国北京三科科技开发公司生产，按 CP2005 版规定配制及灭菌）［1］。 1.3 试验用菌种 大肠埃希菌 Escherichia coli、金黄色葡萄球菌 Staphylocoddus aureus、枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis、白色念珠菌 Candida aibicans、黑曲霉 Aspergillus niger、铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa[CMCC（B）10104]，菌种均来源于中国医学细菌保存中心，均为不超过 5 代的菌株［1］。 2 方法 参照 CP2005 年版二部附录微生物限度检查法中计数方法的验证、控制菌检查方法的验证。 2.1 菌液制备方法 取经（36±1）℃培养 16~18 h 的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌肉汤新鲜培养液，加入 0.9%氯化钠溶液或营养肉汤，10 倍递增稀释制成 50~100 cfu/ml 菌液，计数备用。取经 26 ℃培养24~48 h 的白色念...
