applied biosystems StepOne/StepOnePlus荧光定量PCR仪 相对定量实验简易操作流程 SDS 2.2 相对定量实验简易操作流程 1 StepOne/StepOnePlu s定量PCR仪 相对定量实验简易操作流程 1 . 双击桌面图标 ，或从Start > All Programs > Applied Biosystems > StepOne Software> StepOne Software V2.2开启软件。 进 入 主 界 面后 选 择 Advanced Setup 。 2 . 进入Setup下的Experiment Properties界面： 2 .1 输入实验名称（Experiment Name） 2 .2 确认仪器型号 2 .3 2 .3 在实验类型中，选择Quantitation-Comparative CT (Δ ΔCT) 相对定量实验简易操作流程 2 2 .4 选择试剂种类 2 .5 确认运行模式 3 . 进入Setu p下的Plate Setu p界面，设置基因（Target）及样本（Sample）： 3 .1 在左边 界面中设置基因及样本。利用 按钮添加新的基因，并在Target Name中编辑基因名称，Reporter和Qu encher中选择所标记的荧光基团及淬灭基团。对于Qu encher的选择，如果是MGB探针，请选择NFQ-MGB；如果是TAMRA探针，请选择TAMRA；如果是其他形式的非荧光淬灭基团（如BHQ），请选择None。 相对定量实验简易操作流程 3 也可利用其他按钮保存（ Sav e Target） 或删除（ Delete Target） 已添加的基因。利用 按钮添加样本，在Sample Name中编辑样本名称。 3 .2 在右边 界面中进行样品板的排布。利用鼠标单选或拖曳以选择反应孔，然后勾选左侧的基因及样本，同时在Task选项中指定该反应孔的类型（ U代表未知样本，N代表阴性对照） 。 相对定量实验简易操作流程 4 3 .3 在Select Relative Quantitation Settings中（参看上图）选择对照样本及内参基因。 4 . 在Setup下的Run Method界面，设定反应条件。 5 . 如 果 想 使 用 StepOnePlus 仪 器 上的 VeriFlexTM Block 温 度 梯 度 功 能 ， 需 要 先 在 界面下，勾选Enable VeriFlexTM Block选项。此时Block即被分成六个区块。（此功能仅限StepOnePlus机型) 相对定量实验简易操作流程 5 然后在Run Method界面中，点击想要调整的温度步骤， 在弹出的界面中，选择 并设定每个区块的温度。两相邻区块的温度差异不能超过5度，即第一与第六区块最多可差异25度。 6 . 点击 ，将文件存储成Experiment Document Single files (*.eds) 格式，然后在Run界面中按下 按钮，...
