细胞培养实验室操作准则 任何首次准备开展细胞实验的人员必须首先认真阅读以下准则，然后在已经熟练掌握细胞培养操作技术人员的指导下开始进行细胞实验，并在以后的实验过程中严格遵守各项准则。 一、细胞实验准备 1.进入细胞房前要换鞋，穿无菌服（干净实验工作服），戴手套，接触细胞前喷75%酒精消毒手套。 2.将所需实验用品：培养基（完全培养基、空白培养基）、胰酶（含 ETTA）、枪头（1ml 、200ul 、10ul) 、离心管，预先放置到超净工作台，打开紫外照射 30min后开始细胞实验。 3.观察细胞前，用 75%酒精纱布擦拭显微镜镜头及台面，进行消毒后方可开始观察细胞。 4.观察细胞主要包括：细胞数量（汇合度）、形态、分布情况（是否均匀）、有无漂浮的死细胞和污染等，观察完及时放回培养箱。（如图，汇合度约90%，分布均匀） 5.每次开始细胞实验前，需关 闭 紫外照射，打开超净台风 机 及灯 。用含 75%酒精的纱布擦拭超净工作台。超净台内 物 品放置情况：左 侧 （各式 枪头，及可常 温 放置的试 剂 如PBS 等），右 侧 （5ml 枪头及镊 子 ），废 弃 瓶 位 于 右 上 角 ，尽 可能 远 离操作区 域 ，正 前方为 枪和酒精灯 ，培养基及胰酶放置左 侧 便 于 取 用。 6.超净台在使 用前后，都 需用含 75%酒精的纱布擦拭台面至 纱布上 看 不 到明 显脏物 为 止 ，每天 操作后废 液 缸 需清 洗 用紫外照射，此 外，从 外面拿 进超净台的东 西都 要喷 75%酒精消毒。 7、每周 四 需更 换培养箱中高 压 过的超纯 水 ，每周 五 对 超净台（包括风 机 ）、细胞培养房卫 生 进行打扫 ，每月 对 培养箱进行消毒清 洗 ，确 保 细胞不 受 污染。 8、检查培养箱的 CO2 含量是否正常，如出现异常及时联系细胞平台相关负责人。9、5mL 枪头清洗高压的流程:(1)用洗洁精将枪头超声一遍（2）更换干净的自来水超声清洗 3 遍（3）用超纯水超声清洗 1 遍（4）将枪头捞出后再用超纯水荡洗3 遍（5）放入烘干箱烘干（6）装在铁盒中，注意枪头放置顺序一致，放入高压锅，选择橡胶类（7）高压后放入烘干箱烘干后方可拿入细胞房使用 1ml、200ul、10ul 装入枪盒后放入高压锅高压烘干后方可拿入细胞房使用 二、细胞传代 1.细胞传代前要观察细胞，细胞汇合度达到 80%-90%时可以进行传代。图片 2.以 25cm2 培养瓶为例：打开培养瓶瓶盖，将盖子地面朝下放在...
