通过LAMP实现DNA 的线性扩增 一、LAMP 原理 60-65℃是双链 DNA 复性及延伸的中间温度，DNA 在 65℃左右处于动态平衡状态
因此，DNA 在此温度下合成是可能的
利用 4 种特异引物依靠一种高活性链置换 DNA 聚合酶
使得链置换 DNA 合成在不停地自我循环
扩增分两个阶段
第 1 阶段为起始阶段，任何一个引物向双链 DNA 的互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离，变成单链
上游内部引物 FIP 的F2 序列首先与模板 F2c 结合，在链置换型 DNA 聚合酶的作用下向前延伸启动链置换合成
外部引物 F3 与模板 F3c 结合并延伸，置换出完整的FIP 连接的互补单链
FIP 上的F1c 与此单链上的Fl为互补结构
自我碱基配对形成环状结构
以此链为模板
下游引物 BIP 与 B3 先后启动类似于 FIP 和 F3 的合成，形成哑铃状结构的单链
迅速以 3' 末端的Fl 区段为起点
以自身为模板，进行DNA 合成延伸形成茎环状结构
该结构是 LAMP 基因扩增循环的起始结构
第 2 阶段是扩增循环阶段
以茎环状结构为模板，FIP 与茎环的F2c 区结合
开始链置换合成，解离出的单链核酸上也会形成环状结构
迅速以 3’末端的B1 区段为起点，以自身为模板
进行 DNA 合成延伸及链置换．形成长短不一的2 条新茎环状结构的DNA，BIP 引物上的B2 与其杂交
启动新一轮扩增
且产物 DNA 长度增加一倍
在反应体系中添加2 条环状引物 LF和 LB，它 们 也分别 与茎环状结构结合启动链置换合成，周 而 复始
扩增的最后产物是具 有 不同 个数 茎环结构、不同 长度 DNA 的混 合物
且产物 DNA 为扩增靶 序列的交替 反向重 复序列
二、实验流程 二、阶段实验及需要解决的问题 (一) 实验准备阶段 1、引物设计 2、模板中
