非离子表面活性剂 T riton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 免疫细胞化学中,Triton X-100常用浓度为1%和0.3%,但通常是先配制成30%的Triton X-100储备液,临用时稀释至所需浓度。 30% Triton X-100的配制: 试剂:Triton X-100 28.2ml 0.1mol/L PBS(pH7.3)或0.05mol/l TBS(pH7.4) 72.8ml 配制方法:取Triton X-100及PBS(或TBS)混合,置37℃~40℃水浴中2~3h,使其充分溶解混匀。用前取该储备液稀释至所需浓度。 Triton X-100是一种非离子型表面活性剂(或称清洁剂),分子量为646.86(C34H62O11)。它能溶解脂质,以增加抗体对细胞膜的通透性。1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本,0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清,配制BSA 等。 名称:1.0mol/L Tris·HCl 成分:Tris (MW121.14) 30.29g 蒸馏水 200ml PH值:溶解后,用浓盐酸调 pH至所需点(见下所示), 体积:最后用蒸馏水定容至250ml, 保存:高温灭菌后室温下保存。 1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g 异丙醇 100ml 溶解后,分装于1.5ml离心管中,-20℃保存。 0.2mol/L NaH2PO4 NaH2PO4(MW119.98) 12g 蒸馏水 至 500ml 溶解后,高压灭菌,室温保存。 0.2mol/LNa2HPO4 Na2HPO4·12H2O(MW 358.14) 71.6g 蒸馏水 至 1000ml 溶解后,高压灭菌,室温保存。 10%SDS SDS 10g 蒸馏水 至 100ml 50℃水浴下溶解,室温保存。如在长期保存中出现沉淀,水浴溶化后,仍可使用。 10%过硫酸胺(AP) 过硫酸胺 0.1g 超纯水 1.0ml 溶解后,4℃保存,保存时间为 1 周。 1.5mol/L Tris·HCl(pH8.8) Tris (MW121.14) 45.43g 超纯水 200ml 溶解后,用浓盐酸调 pH至 8.8,最后用超纯水定容至 250ml,高温灭菌后室温下保存。 0.5mol/L Tris·HCl(pH6.8) Tris (MW121.14) 15.14g 超纯水 200ml 溶解后,用浓盐酸调 pH至 6.8,最后用超纯水定容至 250ml,高温灭菌后室温下保存。 40%Acr/Bic(37.5:1) 丙稀酰胺(Acr) 37.5g 甲叉双丙稀酰胺(Bic) 1g 超纯水 至100ml 37℃下溶解后,4℃保存。使用时恢复至室温且无沉淀。 20%Tween20 Tween20 20ml 蒸馏水 至100ml 混匀后4℃保存。 (二)使用液 单去污剂裂解液(50mmol/L Tris·HCl pH8.0,150mmol/L NaCl,1%TritonX-100,100μ g/ml PMSF): 1mol/L Tris·HCl(pH8.0) 2.5ml NaCl 0.438g TritonX-100 0.5ml ...