PABP:poly(A)结合蛋白,能够结合细胞核RNA和mRNA的poly(A)序列,许多真核生物内部有相关类型的蛋白质
What’sitsfunctionofpoly(A)andhowtouseitinexperiments
mRNA3'延伸的多聚腺苷酸经常被描述为poly(A)尾部,有这种特征的mRNA称为poly(A)+)
poly(A)序列并非由DNA编码,在细胞核内它是在转录之后被加到RNA上的
Poly(A)被特异的蛋白质PABP结合,有助于稳定mRNA,防止降解;作为核糖体的识别信号,使mRNA分子有效翻译
在试验中的应用:具有poly(A)的mRNA在oligo(dT)引物和反转录酶的作用下,可合成出双链cDNA
随后将它与质粒载体构成重组分子,并转化给大肠杆菌寄主细胞进行扩增
应用这种方法能够分离和扩增我们所期望研究的基因或DNA片段
Tocomparetheprocessofproteinsynthesisforprokaryoticandeukaryotic
真核生物蛋白质合成与原核生物两者相比,密码相同,各种组分相似,亦有核糖体、tRNA及各种蛋白质因子
总的合成途径也相似,有起始、延伸及终止阶段,但也有不同之处
⑴原核生物的翻译与转录偶联在一起,即边转录边翻译;而真核生物的翻译与转录不偶联
真核mRNA前体需经加工修饰成为成熟mRNA后,从核内输入细胞质,然后进行翻译
⑵真核生物蛋白质合成机构比原核生物复杂,起始步骤涉及起始因子众多,过程复杂
如起始氨基酸;核糖体组成;起始因子的种类等等
⑶真核生物蛋白质合成的调控复杂
⑷真核生物与原核生物的蛋白质合成可为不同的抑制剂所抑制
WhatisTu-Tscycle
EF-Tu一GTP将氨酞-tRNA安置在核糖体上后,以EF-Tu-GDP的形式释放
EF-Ts用来催化GTP与GDP