生物化学蛋白质的性质实验VIP专享

生物化学实验讲义 实验一 蛋白质的性质实验——蛋白质及氨基酸的呈色反应及蛋白质的沉淀反应 实验目的 1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。 2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 4．加深对蛋白质溶液的胶体性质的认识，了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。， 一、茚三酮反应 1.实验原理 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有 α —氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。 β -丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。尿素、马尿酸、二酮吡唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。 该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。 茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成 CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。 此反应的适宜 pH为 5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同 pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。 2.材料、仪器与试剂 蛋白质溶液；新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水=1∶9）；0.5%甘氨酸溶液；0.1%茚三酮水溶液；0.1%茚三酮-乙醇溶液 3.实验操作 ①取 2支试管分别加入鸡蛋清溶液和 0.5%甘氨酸溶液 1ml，再各加 0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热 1~2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。 ②在一小块滤纸上滴一滴 0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴 0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。 二、黄色反应 1.实验原理 含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。 多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。 2.材料、仪器与试剂 鸡蛋清溶液；大豆提取液(将大豆浸泡充分吸胀后，研磨成浆状用纱布过滤)；头发；指甲；0.5%苯酚溶液；浓硝酸；0.3%色氨酸溶液；0.3%酪氨酸溶液；10%氢氧化钠溶液 3.实验操作 向 7个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或 用微火加热。待各管出现黄色后，于室温...