培养基的制备与灭菌

培养基的制备与灭菌实验八培养基的制备与灭菌一、目的要求1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2.掌握培养基的配置方法。3.掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性．因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同．例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。三、实验材料1.药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、Imol/L 的 NaOH 和 HCI 溶液。2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。3.其他物品：药匙、称量纸、pH 试纸、记号笔、棉花等。四、操作步骤(一)玻璃器皿的洗涤和包装1•玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中•用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2.灭菌前玻璃器皿的包装(1)培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。(2)移液管.的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉），它的作用是避免外界及图 8-1 移液管的包扎口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约 0.5cm 左右，棉花自身长度约 l~1.5cm。塞棉花时.可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约 5cm 左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成 45°C 角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧.在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。（二）液体及固体培养基的配制过程 1.液体培养基配制1）称量：一般可用 0.01g 天平称量配制培养基所需的各种药品，先按培养基配方计算出各成分的用量.然后进行准确称量。2）溶解：将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水），用玻璃棒搅动，加热溶解。3）定容：待全...