B．液体剪切力法细胞破碎的评价 超声波：超声波处理法 优点： 高效（~95%破碎率） 快速（若干秒到几分钟时间） 对多种生物有效 操作简便 小体积（几毫升） 存放简便（没有可拆卸部件） 缺点： 产热量大 实验室使用（无法规模化） 适合低细胞浓度 高速转盘法 优点 破碎效率高 细胞浓度适中 多种尺寸可供选择 缺点 产热 存放困难 安全问题：高速转盘 法兰西挤压机： 优点： 易于使用 样品小 细胞浓度适中 缺点： 不对所有细胞有效 样品小 实验工具 压力：高压匀浆破碎 优点： 经多次循环可达到理想效果 对多种微生物有效 细胞浓度适中 扩大性极佳：可确定的扩大参数 操作简便 连续式操作 大体积操作的能力 缺点： 需要高压 液体渗漏：高压封条 多次操作才能达到高效率 存放困难：密封装置渗漏 多次操作才能达到低细胞浓度 粘性高：DNA 释放 维修：阀门磨损 C．固体剪切力法细胞破碎的评价 研磨法：珠磨法 优点： 高破碎效率 对多种微生物有效 压力小：易于存放 细胞浓度高：泥浆浓度可达 500 克/升 连续式和间歇式操作 多种尺寸可供选择 可确定的扩大参数 低维修费：没有高压密封装置，可拆卸部件少 缺点： 小珠子消耗 产品污染 零部件和服务：欧洲到美国 E．非机械法细胞破碎的评论 干燥法： 操作简单 适合大量样品：例如，酵母和蔬菜提取 需增加必要的加工步骤：细胞浓缩，去水 并非对所有细胞有效 操作结果难以预测 溶剂法： 有机溶剂：己烷，苯 有效改变细胞膜渗透性 在无细胞体系中频繁使用 溶剂的毒性 对蛋白质潜在的损坏 EPA 和 OSHA 考虑 物理法：渗透压冲击法： 概念： 盐浓度快速改变 盐的种类：NaCl，甘油，蔗糖 破碎细胞壁以释放胞内物质 优点： 操作简单 无需复杂仪器 低温操作 不影响蛋白质结构 对动物细胞和红细胞有效 缺点： 对微生物不一定有效 高盐浓度的引入和其随后的消除是必要的 冻融法 概念： 把细胞浆液冻结随后使其融化 改变细胞壁渗透性 胞内物质在融化时释放出来 优点： 细胞浆液可以盛放在无菌系统中 相对简单和方便 相对温和的方法 可以处理大量样品 缺点： 并非对所有的微生物有效 蛋白质释放率取决于生物体
