两 种 定 量 分 析 方 法 的 比 较 及 Taqman 探 针 、引物设计原则 遗传物质 DNA 首先要把所携带的 遗传信息转录成为信使 RNA（mRNA）,携带遗传信息的mRNA 从细胞核进入到细胞质中与核糖体结合，在核糖体中 mRNA 携带的 遗传信息被翻译成为多肽，多肽经过进一步加工后变成蛋白质，至此遗传物质 DNA 完成了表达过程。期间的 转录过程是基因表达中非常重要的 调节步骤，所转录的 mRNA 的 多少直接影响着相关最终蛋白质的 多少，所以通过对细胞内某条基因 mRNA 含量 多少的 分 析 ，就能大致判断出该条基因的 表达是否活跃。 定 量 PCR 仪是在普通 PCR 仪的 基础上加装了荧光激发装置和荧光检 测 装置，PCR 扩 增和检 测 同 时 进行 ；在 PCR 反 应 体系 中加入荧光基团 ，利 用 荧光信号 的 积 累 实 时 监 测 整 个 PCR进程，最后通过标 准 曲 线 对未 知 模 板 进行 定 量 分 析 。该技 术 于1996 年 由 美 国Applied Biosystems 公 司 推 出，由 于 该技 术 不 仅 实 现 了 PCR 从定 性 到定 量 的 飞 跃，而 且 与常规PCR相比 ，它 具 有 特 异 性 更 强 、有 效 解 决PCR 污 染 问 题 、自 动 化 程度 高 等 特 点 ，目 前 已 得 到广泛 应 用 。 定 量 PCR 常 用 的 三个常 用 概念 扩 增 曲 线 、荧光阈 值 、Ct 值 扩 增 曲 线 ： 反 映PCR 循 环 次 数 和荧光强 度 的 曲 线 ，定 量 PCR 仪每 次 轮PCR 扩 增 都 会 自 动记 录荧光强 度 的 变化 荧光阈 值 ： 样 本 的 荧光背 景 值 和阴 性 对照 的 荧光值 ，手 动 设置的 原则要大于 样 本 的 荧光背景 值 和阴 性 对照 的 荧光最高 值 ，同 时 要尽 量 选 择 进入指 数 期的 最初 阶 段 ，并 且 保证 回 归 系 数 大 于 0.99。 CT 值： PCR 扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数 。 扩增曲线 阈值及 CT 值 荧 光定量 PCR 的数学原理 理想的 PCR 反应： X=X0*2n 非理想的 PCR 反应： X=X0* (1+Ex)n （n：扩增反应的循环次数 ；X：第 n 次循环后的产物量；X0：初始模板量；Ex：扩增效率） 在扩增产物达到阈值线时: XCt=X0 (1+Ex)Ct =M (1) XCt:荧光扩增信...
