传染病检测技术在血液筛查中应用的现状

传染病检测技术在血液筛查中应用的现状 北京市红十字血液中心 邱艳 一、 血液筛查的发展历史 （PPT1）从血液筛查的发展历史可以看到，在二十世纪 60年代，输血传染病高达 25%。1970年发现了乙肝表面抗原，然后对其进行检测，输血后的感染率降到 10%。1980年检测艾滋病病毒后，输血感染率继续下降，随后检查抗核抗体、丙肝等，输血感染率降到很低。 （PPT2）显示的是输血传染病的检测方法，1970年采用颗粒凝集法，1980年采用ELISA酶联免疫法，1990年采用化学发光法，目前多采用核酸法。 目前，输血感染率的残余风险逐渐降低，2001年达到百万分之几的概率。 二、HIV感染诊断 （一） HIV 感染诊断实验的种类 1. 抗体检测实验 间接酶联法测抗体 , 直接 ( 双抗原夹心 ) 法测抗体 , 快速诊断法检测抗体抗体确认试剂 , 其他抗体检测试剂。 2. 抗原检测实验：主要是检测 P24 抗原。 3. 抗原和抗体联合检测实验：与 ELISA抗体检测兼容性良好，成本低。 4. 核酸检测实验：核酸定性和定量检测实验。 （二）HIV检测的标记物 PPT6显示的是 HIV的不同标志物。HIV感染后的10天以内是窗口期，不能检测出病毒。约 5天后会出现P24抗原，即病毒核酸 RNA复制，随后机体的免疫系统对其进行识别，会产生 IgG、IgM。四十天后，会出现IgG抗体。这些标志物中，只有 IgG抗体是稳定的。 （三） HIV 抗体检测方法 1.酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA） ELISA最早用去污剂裂解HIV 或感染细胞液提取物作抗原，IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测。 2.抗体确证实验 3.其他类抗体检测试验 （四）抗 -HIV EIA 检测试剂的发展 第一代是HIV-1病毒裂解产物，检测类型是IgG类抗体。第二代是HIV-1+2人工合成肽，检测类型是IgG类抗体。第三代是HIV-1+2基因重组，利用双抗原加锌法，检测IgG、IgM抗体，把窗口期缩短到三周。第四代是HIV-1+2基因重组，利用双抗原加锌法，检测IgG、IgM抗体与抗原，把窗口期缩短到两周。现在又加入核酸，可以缩短到一周之内，越来越安全。 （五）确证试验 初筛 HIV 阳性的，利用确证试验来确认。 确证试剂： 蛋白印迹法（Western Blot，WB）类确证试剂：抗原多为全病毒裂解抗原，用聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳将 HIV 蛋白按其分子大小进行分离，将凝胶中的不同 HIV 蛋白条带电泳转移至硝酸纤维薄膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶标抗体染色，检测针对不同结构...