精品文档---下载后可任意编辑Herceptin 对 NK 细胞体外扩增和杀伤活性的影响及机制讨论的开题报告一、讨论背景和意义2024 年，乳腺癌已成为全球女性最常见的恶性疾病之一，其中HER2 阳性乳腺癌占比较大。以往的讨论表明人类攻击性 NK 细胞在对抗HER2 阳性乳腺癌中发挥了重要的作用，但 HER2 阳性乳腺癌细胞的表面 HER2 受体抑制剂 Herceptin 对 NK 细胞的作用并未得到充分探究。因此，本讨论旨在深化探究体外条件下 Herceptin 对 NK 细胞扩增和杀伤活性的影响及其机制，为乳腺癌治疗提供新的思路和方向。二、讨论内容和方法1.实验内容(1)通过分离和纯化 NK 细胞，建立体外 NK 细胞培育模型，分别添加不同浓度的 Herceptin，探究其对 NK 细胞的影响。(2)利用 MTT 法、流式细胞术等技术，探究 Herceptin 对 NK 细胞扩增和杀伤活性的影响及其机制。具体包括测定细胞增殖曲线、细胞周期分布、细胞凋亡率、IL-2 产生水平、 NKG2D 的表达水平等重要指标。(3)利用 Western blot 和 Real-time PCR 方法，探究 Herceptin对 NK 细胞活性相关分子的表达水平变化及其机制。2.实验方法(1)细胞培育方法：采纳 Ficoll-Paque 浓缩灌洗法分离人 PBMCs，随后从 PBMCs 中分离出 NK 细胞，定期观察细胞生长状态，对比不同时间点和不同处理组的细胞密度、生长速率等指标。(2)MTT 法：利用 MTT 还原法测定各组细胞增殖能力，并画出细胞增殖曲线。(3)流式细胞术：细胞周期方面采纳 propidium iodide 染色，细胞凋亡方面采纳 Annexin-V/PI 染色，细胞表面抗原检测采纳相应抗体与荧光染料结合技术（FITC、APC、PE 等），并利用流式细胞仪检测细胞状态及相关指标。(4)Western blot 和 Real-time PCR：通过 Western blot 和Real-time PCR 对 Herceptin 干预 NK 细胞后，活性相关蛋白和基因的表达水平做定量检测和分析。精品文档---下载后可任意编辑三、预期结果估计通过对 Herceptin 对 NK 细胞扩增和杀伤活性的影响及其机制的讨论，探明 Herceptin 在体外可促进 NK 细胞的杀伤活性，从而进一步为乳腺癌治疗提供新的治疗策略和方向。
