精品文档---下载后可任意编辑NY-ESO-1 抗原 T 细胞受体基因慢病毒载体的构建及病毒的产生与鉴定的开题报告1. 讨论背景及意义肿瘤治疗中，免疫治疗作为一种新兴的治疗方法，已经逐渐成为讨论的热点。NY-ESO-1 抗原是一种在许多肿瘤中高表达的癌胚抗原，对于免疫治疗来说是一个极具吸引力的靶点。近年来，CAR-T 细胞治疗已成为临床上最具前景的免疫治疗方法之一，然而由于 CAR-T 细胞治疗的不足，诱导 T 细胞的治疗方法才是公认的较优解决方案，因此在 T 细胞治疗的探究中，T 细胞受体（TCR）基因重组技术也是免疫治疗的重要讨论方向之一。2. 讨论内容及方向本讨论将以 NY-ESO-1 抗原为靶点，设计构建基于 TCR 技术的治疗系统。利用慢病毒作为载体，将 NY-ESO-1 抗原特异性 TCR 基因转染至人外周血 T 细胞中，目的是诱导 T 细胞的特异性杀伤肿瘤细胞。本讨论包括以下方面：（1）猎取 NY-ESO-1 特异性 TCR 基因序列；（2）设计基因重组克隆，构建 NY-ESO-1 抗原 T 细胞受体基因；（3）将 T 细胞受体基因连接到慢病毒载体中；（4）将慢病毒载体转染到恒河猴肾细胞中，制备病毒；（5）检测病毒的纯度和活性的；（6）利用脂质体介导转染法将 NY-ESO-1 抗原特异性 TCR 基因转染在外周血 T 细胞中；（7）检测转染后的 T 细胞表达和功能。3. 讨论方法及技术路线（1）猎取 NY-ESO-1 特异性 TCR 基因序列：利用 PCR 技术在 NY-ESO-1 抗原特异性 T 细胞中扩增 TCR 基因。（2）设计基因重组克隆，构建 NY-ESO-1 抗原 T 细胞受体基因：选取合适的 TCR V 和 J 基因段，将 CD3ζ 链与 TCR V 和 J 链相连构建完成整个 NY-ESO-1 抗原特异性 TCR 基因。精品文档---下载后可任意编辑（3）将 T 细胞受体基因连接到慢病毒载体中：利用限制性内切酶将NY-ESO-1 抗原特异性 TCR 基因与慢病毒载体连接。（4）将慢病毒载体转染到恒河猴肾细胞中，制备病毒：将慢病毒载体转染至恒河猴肾细胞中，培育 12~48h 后采集病毒。（5）检测病毒的纯度和活性：通过表面过表达 NY-ESO-1 抗原的细胞株进行感染实验，利用流式细胞仪检测病毒感染率和感染细胞的TCR 表达情况，从而推断病毒的纯度和活性。（6）利用脂质体介导转染法将 NY-ESO-1 抗原特异性 TCR 基因转染在外周血 T 细胞中：利用脂质体将 NY-ESO-1 抗原特异性 TCR 基因转染在外周血 T 细胞中。（7）检测转染后的 T 细胞...
