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实验一蛋白质的沉淀与凝固

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1 Ⅱ实验内容 实 验 一 蛋 白 质 的 沉 淀 与 凝 固 蛋 白 质 溶 液 是 一 稳 定 的 亲 水 性 溶 胶 液 , 其 稳 定 的 因 素 有 二 : 一 是 蛋 白 质 胶 粒 上 的电 荷 使 之 相 互 排 斥 , 不 易 凝 集 成 团 ; 二 是 胶 粒 表 面 的 水 化 膜 , 它 使 胶 粒 与 水 融 洽 相 依 ,又 在 胶 粒 之 间 起 了 隔 离 作 用 。 如 果 上 述 两 种 稳 定 蛋 白 质 溶 液 的 因 素 被 破 坏 , 蛋 白 质 将 于溶 液 中 沉 淀 析 出 。 促 使 蛋 白 质 沉 淀 的 因 素 很 多 , 大 致 可 分 为 两 类 : 第 一 类 是 可 逆 的 沉 淀 反 应 。 这 时 蛋 白 质 的 空 间 构 象 未 受 到 很 大 改 变 , 除 去 沉 淀 因 素 后 ,可 以 重 新 溶 解 , 例 如 盐 析 和 低 温 乙 醇 沉 淀 蛋 白 。 第 二 类 是 不 可 逆 的 沉 淀 反 应 , 重 金 属 盐 类 或 生 物 碱 试 剂 沉 淀 蛋 白 后 , 由 于 蛋 白 质 结 构 发生 重 大 改 变 , 所 以 不 再 溶 于 水 中 。 不 可 逆 的 蛋 白 质 沉 淀 多 表 示 蛋 白 质 已 经 变 性 。 变 性 的蛋 白 质 在 等电 点附近加热时 , 蛋 白 质 分 子间 相 互 盘绕而变 成 坚实 的 凝 块。 一 、 蛋 白 质 的 盐 析 [原理] 高浓度的 盐 离 子可 与 蛋 白 质 胶 粒 争夺水 化 膜 , 同时 盐 又 是 强电 解 质 , 可 抑制蛋 白 质的 解 离 。 因 而用 高浓度的 中 性 盐 , 使 蛋 白 质 带电 量减少, 水 化 膜 破 坏 而从溶 液 中 沉 淀 出来。 盐 析 沉 淀 蛋 白 一 般不 引起 蛋 白 变 性 , 故 常 用 于 分 离 各 种 天 然 蛋 白 质 。 由 于 蛋 白 质 的 组 成 及 性 质 不 同, 所 以 盐 析 时 所 需 中 性 盐 的 浓度也 不 相 同。 例 如 半 饱 和 的硫 酸 铵 沉 出 球 蛋 白 , 饱 和 的 硫 酸 铵 则 沉 出 清 蛋 白 。 [操 作 ] 1.取 一 试 管 , 加入 3ml 5%蛋 白 质 溶 液 及 3ml 饱 和 硫 酸 铵 溶...

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