【一、提RNA】 一、实验准备： 1、试剂：75%乙醇、Trizol、1.5mL 进口EP 管、氯仿、异丙醇、进口枪头(RNA 专用)、 2、配75%乙醇(DEPC 水+无水乙醇)，放-20℃冰箱预冷； 3、预冷离心机(1.5mL EP 管用的)； 4、清洁桌面，酒精喷过之后擦干，新手套、两层口罩； 二、操作步骤： 01、弃上清（不回收，直接倒去）； 02、1mL/孔 PBS 洗两遍（不回收，直接倒去，随后用200μL 枪吸尽 PBS）； 03、每孔加 500μL Trizol，轻晃，随后室温放置 2min 左右； 04、枪头吹打，吸出放入 1.5mL 进口EP 管； 05、加入 100μL 氯仿(即 1/5 体积的trizol)； 06、4℃离心机，12000g，15min； 07、吸 200μL(可减少)上清放入新的1.5mL 进口EP 管中（注意：只能吸到上清）； 08、加入等体积异丙醇，充分混匀，常温放置 10-30min(15min)； 09、4℃离心机，12000g，10min； 10、倒掉液体，加入 1mL 预冷的75%乙醇剧烈混匀； 11、4℃离心机，7500g，5min； 12、倒掉上清，加入 1mL 预冷的75%乙醇，混匀； 13、4℃离心机，7500g，5min； 14、倒掉上清，倒扣在餐巾纸上，5-10min，用针头或者 200 微升枪头去掉管壁上的水珠； 15、每管中加入 40μL(40μ-60μL)的DEPC 水，吹打溶解； 16、测浓度（先知楼21 楼测RNA 浓度，带DEPC 水、灭菌的dd 水、10 微升枪和枪头）； 三、注意事项 01、如果当时不测RNA 浓度，可暂时把RNA 放在-20℃冰箱。但长时间(>24h)保存，需要放在-80℃冰箱； 02、异丙醇作用是沉淀RNA，作用比 乙醇好 ； 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 【二、测RNA 浓度】 一、实验准备： 01、先知楼21 楼-2109 教室，一个冰盒+DEPC 水+10 微升枪、灭菌dd H2O、10μL 枪头(RNA专用)、本子+笔； 二、操作步骤： 01、登记； 02、打开电脑==>打开“N”软件==>点击“Nucleic acid”==>选择“OK”==>选择“RNA”； 03、灭菌dd H2O 清洗 2-3 遍，擦干； 04、DEPC 水 校零：即加 DEPC 水一滴，点击“Blank”，擦干； 05、测RNA：加样品一滴，点击“measure”，擦干，随后加下一个样品； 06、记录数据，包括 RNA 浓度（<1000ng/μL）、260/280； 07、灭菌dd H2O 清洗 2-3 遍，擦干； 08、-80℃冰箱保存； 三、注意事项 230nm 代表有机物水平(碳水化合物)，260nm 代表 RNA 水平，280nm 代表蛋白水平，260/230表示有机物量，260/280 代表 RNA 提取...
