【一、提RNA】 一、实验准备: 1、试剂:75%乙醇、Trizol、1.5mL 进口EP 管、氯仿、异丙醇、进口枪头(RNA 专用)、 2、配75%乙醇(DEPC 水+无水乙醇),放-20℃冰箱预冷; 3、预冷离心机(1.5mL EP 管用的); 4、清洁桌面,酒精喷过之后擦干,新手套、两层口罩; 二、操作步骤: 01、弃上清(不回收,直接倒去); 02、1mL/孔 PBS 洗两遍(不回收,直接倒去,随后用200μL 枪吸尽 PBS); 03、每孔加 500μL Trizol,轻晃,随后室温放置 2min 左右; 04、枪头吹打,吸出放入 1.5mL 进口EP 管; 05、加入 100μL 氯仿(即 1/5 体积的trizol); 06、4℃离心机,12000g,15min; 07、吸 200μL(可减少)上清放入新的1.5mL 进口EP 管中(注意:只能吸到上清); 08、加入等体积异丙醇,充分混匀,常温放置 10-30min(15min); 09、4℃离心机,12000g,10min; 10、倒掉液体,加入 1mL 预冷的75%乙醇剧烈混匀; 11、4℃离心机,7500g,5min; 12、倒掉上清,加入 1mL 预冷的75%乙醇,混匀; 13、4℃离心机,7500g,5min; 14、倒掉上清,倒扣在餐巾纸上,5-10min,用针头或者 200 微升枪头去掉管壁上的水珠; 15、每管中加入 40μL(40μ-60μL)的DEPC 水,吹打溶解; 16、测浓度(先知楼21 楼测RNA 浓度,带DEPC 水、灭菌的dd 水、10 微升枪和枪头); 三、注意事项 01、如果当时不测RNA 浓度,可暂时把RNA 放在-20℃冰箱。但长时间(>24h)保存,需要放在-80℃冰箱; 02、异丙醇作用是沉淀RNA,作用比 乙醇好 ; 03、 04、 05、 06、 07、 08、 09、 【二、测RNA 浓度】 一、实验准备: 01、先知楼21 楼-2109 教室,一个冰盒+DEPC 水+10 微升枪、灭菌dd H2O、10μL 枪头(RNA专用)、本子+笔; 二、操作步骤: 01、登记; 02、打开电脑==>打开“N”软件==>点击“Nucleic acid”==>选择“OK”==>选择“RNA”; 03、灭菌dd H2O 清洗 2-3 遍,擦干; 04、DEPC 水 校零:即加 DEPC 水一滴,点击“Blank”,擦干; 05、测RNA:加样品一滴,点击“measure”,擦干,随后加下一个样品; 06、记录数据,包括 RNA 浓度(<1000ng/μL)、260/280; 07、灭菌dd H2O 清洗 2-3 遍,擦干; 08、-80℃冰箱保存; 三、注意事项 230nm 代表有机物水平(碳水化合物),260nm 代表 RNA 水平,280nm 代表蛋白水平,260/230表示有机物量,260/280 代表 RNA 提取...