酶动力学综合实验实验（一）——碱性磷酸酶值的测定【目的要求】1
了解底物浓度对酶促反应速度的影响2
了解米氏方程、值的物理意义及双倒数作图求值的方法
【实验原理】1、碱性磷酸酶：碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多
其次为肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织
但它不是单一的酶，而是一组同功酶
本实验用的碱性磷酸酶是从大肠杆菌中提取的
2、米氏方程： 在讨论底物浓度与酶促反应速度的定量关系时，导出了酶促反应动力学的基本公式，即： (1)式中：v 表示酶促反应速度， 表示酶促反应最大速度， [S]表示底物浓度， 表示米氏常数
3、 值的测定主要采纳图解法，有以下四种： ① 双曲线作图法（图 1-1，a）根据公式（1），以 v 对[s]作图，此时 1/2时的底物浓度[s]值即为值，以克分子浓度（M）表示
这种方法实际上很少采纳，因为在实验条件下的底物浓度很难使酶达到饱和
实测一个近似值，因而 1/2不精确
此外由于 v 对[S]的关系呈双曲线，实验数据要求较多，且不易绘制
② 作图法双倒数作图法（图 1-1，b）实际工作中，常将米氏方程（式（1））作数学变换，使之成为直线形式，测定要方便、精确得多
其中之一即取（1）式的倒数，变换为 方程式： (2)以 对 作图，即为形式
此时斜率为，纵截距为
把直线外推与横轴相交，其截距相交，其截距即为—
③ 作图法（略）把（2）式等号两边乘以，得： (3)以 v 对作图，这时斜率为，纵截距为，横截距为
④ 作图法（略）把（2）式等号两边乘以[S],得： (4)以对[s]作图，这时斜率为，纵截距为
（a） (b)本实验主要以双倒数法，即 作图法来测定碱性磷酸酶值
具体原理如下：本实验以碱性磷酸酶为例，用磷酸苯二钠为其作用物，碱性磷酸酶能分解磷酸苯二钠产生酚和磷酸，在适宜条件下（10
0，和 60℃），准确反应 13 分钟
