一、包装细胞 293T 细胞得培育一、293T 细胞得冻存1、 随着传代得次数增加，293T 细胞会出现生长状态下降，出现突变等
所以要在细胞购进时就进行冻存
2、 在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率
3、 倒去细胞上清液，加入 D-Hank's 液洗去残留得培育基
4、 加入 0、25%得胰酶，消化 10-20s 后倒去
5、 镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，加入新奇培育基吹打混匀
6、 细胞计数
7、将细胞离心，1000rpm，2min
8、 根据计数结果加入细胞冻存液（70%完全培育基+20%FBS+10% DMSO）重悬细胞，密度为 3×106个/ml
10、 第二天将细胞放入液氮灌，并记录
二、293T 细胞得传代1、 当细胞生长至汇合率达到 80~90%需要对细胞进行传代操作，以扩大细胞数量，维持细胞良好得生长状态
2、 消化细胞，方法同上
3、 细胞离心结束后，加入完全培育基重悬
密度为 3×105个/ml
4、 分到 10cm 培育皿中，10ml/皿
三、293T 细胞得复苏1、 当细胞传代次数过多（超过 50 代），细胞状态变差时或细胞出现污染事故时，需要丢弃并对开始冻存得细胞进行复苏
2、 打开水浴锅，设置温度为 40℃
3、 查瞧细胞库记录，根据记录从液氮灌中取出冻存得细胞（需戴上棉手套，防止被冻伤），迅速丢入水浴锅中并快速晃动，在 1~2 min 内使细胞溶液完全溶解
4、 将 1ml 细胞溶液加入 9 ml 完全培育基中并混匀后转入 10cm 培育皿
5、 放回 37℃、3%CO2与 95%相对湿度得培育箱中培育
6、 第二天观察细胞存活率
倒掉旧得培育基，加入 10ml 新奇培育基
二、慢病毒得包装、浓缩与滴度测定1、 所用病毒检测引物为 WPRE 特异引物，序列如下5'-CCTTTCCGGGACTTTCGCTT
