一、包装细胞 293T 细胞得培育一、293T 细胞得冻存1、 随着传代得次数增加，293T 细胞会出现生长状态下降，出现突变等。所以要在细胞购进时就进行冻存。2、 在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。3、 倒去细胞上清液，加入 D-Hank's 液洗去残留得培育基。4、 加入 0、25%得胰酶，消化 10-20s 后倒去。5、 镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，加入新奇培育基吹打混匀。6、 细胞计数。7、将细胞离心，1000rpm，2min。8、 根据计数结果加入细胞冻存液（70%完全培育基+20%FBS+10% DMSO）重悬细胞，密度为 3×106个/ml。10、 第二天将细胞放入液氮灌，并记录。二、293T 细胞得传代1、 当细胞生长至汇合率达到 80~90%需要对细胞进行传代操作，以扩大细胞数量，维持细胞良好得生长状态。2、 消化细胞，方法同上。3、 细胞离心结束后，加入完全培育基重悬。密度为 3×105个/ml。4、 分到 10cm 培育皿中，10ml/皿。三、293T 细胞得复苏1、 当细胞传代次数过多（超过 50 代），细胞状态变差时或细胞出现污染事故时，需要丢弃并对开始冻存得细胞进行复苏。2、 打开水浴锅，设置温度为 40℃。3、 查瞧细胞库记录，根据记录从液氮灌中取出冻存得细胞（需戴上棉手套，防止被冻伤），迅速丢入水浴锅中并快速晃动，在 1~2 min 内使细胞溶液完全溶解。4、 将 1ml 细胞溶液加入 9 ml 完全培育基中并混匀后转入 10cm 培育皿。5、 放回 37℃、3%CO2与 95%相对湿度得培育箱中培育。6、 第二天观察细胞存活率。倒掉旧得培育基，加入 10ml 新奇培育基。二、慢病毒得包装、浓缩与滴度测定1、 所用病毒检测引物为 WPRE 特异引物，序列如下5'-CCTTTCCGGGACTTTCGCTTT-3' (forward primer),5'-GCAGAATCCAGGTGGCAACA-3' (reverse primer) and5'-FAM-ACTCATCGCCGCCTGCCTTGCC-TAMRA-3' (probe)2、 TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems， cat、 no、 4304437)3、 TaqMan DNA Template Reagent Kit (Applied Biosystems， cat、 no、 401970)4、 TaqMan RNaseP control reagent (Applied Biosystems， cat、 no、 4316844) 用于包装得 293T 细胞得培育用于包装得 293T 细胞(ATCC No、 CRL-11268)必需选择处于生长旺盛期，细胞状态较佳，存活率 90%以上，细胞边缘清楚，传代次数较低。任何时候细胞汇合率都不准达到 100%。慢病毒得包装1、 预先准...
