基因工程实验(答案)(3 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。——凯1.简述本学期从基因组 DNA 提取到重组质粒鉴定的实验流程？（实验题目的总结）答：①基因组 DNA 的提取；② PCR 扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化 PCR扩增的 DNA 片段以及 DNA 的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。2.如何正确使用微量移液器？（自己写的）答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA 通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？答：loading Buffer。主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。4.简述制作 1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。（题目有歧义）答：①取 0.5g 琼脂粉置于锥形瓶，量取 50ml 1×TBE 溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至 55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量 1×TBE 溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线；④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经 BE 染色放入成像系统显色、观察。5.琼脂糖凝胶电泳中 DNA 分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书 P75）答：①样品 DNA 的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否；6.在使用苯酚进行 DNA 抽提时应注意什么？（实验书 P31）答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。7.在基因组 DNA 提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？答：酚——是蛋白质变性，抑制 DNA 酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。8.提取 DNA 实验中，通常可选用哪些试剂沉淀 DNA？答：冷的无水乙醇，冷的异丙醇，终浓度为 0.1～0.25mol/L 的 NaCl9.简述在 DNA 提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离...
