实验 1 大肠杆菌得培育与分离 高二年级 班 姓名 学号: 实验日期:____月 日【知识准备】1.背景知识:大肠杆菌(Escherichia coli,E、coli)就是微生物学与遗传学常用得实验材料,为单细胞原核生物,宽约 0、5×1～3 微米;具有由肽聚糖组成得细胞壁;周身具鞭毛,能运动。 大肠杆菌就是在人与动物肠道中生活得、不会致病得正常栖居菌,但若进入胆囊、膀胱等处也会引起炎症。它能利用多种糖类物质产酸、产气,其代谢类型为异养兼性厌氧型;其代谢活动能产生大肠杆菌素(抑制肠道内其她分解蛋白质得微生物生长),还能合成维生素 B 与 K。它们在肠道中大量繁殖,几乎占粪便干重得 1/3。实验室中用于培育微生物得营养物质称为培育基。按培育基得物理状态可分为:液体培育基与固体培育基。将已知得菌种引入新配制得培育基得过程称为接种。而在固体培育基表面用蘸有菌种得接种环连续划线,既可以达到接种得目得,又可以实现分离菌种得目得。这就是因为划线过程中接种环与培育基表面接触,接种环上得菌液逐渐减少,因此划线最后部分细菌间得距离加大,经过培育后可出现由单个细菌细胞形成单菌落,这样就达到了分离细菌得目得。2.实验原理:使用通用得细菌培育基(如 LB 液体培育基)可扩大培育大肠杆菌,使大肠杆菌迅速扩增。在 LB 固体平面培育基上对大肠杆菌进行划线分离,经培育后培育基上每一个菌体会形成一个单独得菌落。这就是消除污染杂菌得通用方法,也就是用于筛选突变菌株得最简便方法之一。为保证配制得培育基上只生长大肠杆菌,而不被其她微生物污染,实验过程中要进行无菌操作。3.思考题(1)为什么培育过程中会出现被其她微生物污染得现象？(2)进行了无菌操作就是否肯定就不会出现被其她微生物污染得现象吗？(3)本实验得关键步骤——划线分离得目得就是什么？(4)在做第二次以及其后得划线操作时,为什么总就是从上一次划线得末端开始划线?在操作过程中应注意什么？【实验目得】1.利用液体培育基进行大肠杆菌得扩增2.用固体平面培育基进行大肠杆菌得划线分离3.了解微生物实验得操作原理与培育条件【材料用具】大肠杆菌菌种装有固体培育基得、已灭菌培育皿;装有 LB 液体培育基得、已灭菌得 250ml 三角瓶封口膜与橡皮圈 酒精灯 接种环 镊子 装有酒精棉球得广口瓶 恒温培育箱 摇床【操作流程】 【实验步骤】1.接种前得准备进行接种操作前,应先洗手,再用 70%得酒精棉球擦拭双手与桌面。待酒精挥发之后,再点燃酒精灯。2.接种(1)接种时得要求接种过...
