酵母双杂交文库筛选与蛋白互作验证服务

酵母双杂交技术就是讨论蛋白质-蛋白质相互作用得一种蛋白组学方法，就是基于对真核生物得转录因子调控转录起始过程得认识而发明得技术。其基本原理就是利用真核生物酵母得转录激活因子 Gal ４可分为结构上分开并且功能独立得两个结构域:N 端１-147 ａａ DNA结合结构域（Ｄ NAb ｉｎ di ｎ gdo ｍ ai ｎ，BD)与Ｃ端７ 6 ８—8 ８ 1 ａ a 转录激活结构域(Act ｉｖ ation Ｄｏ main,AD)，Gal4 得 N 端与Ｃ端可以分开构建表达质粒，将 N 端与诱饵蛋白(讨论得目标蛋白Ａ）融合表达,C 端与细胞 cDNA 或者猎物蛋白 X 融合表达，假如 cD Ｎ A编码得蛋白 x 能与 A 互相作用，就能把 Gal ４得 C 端与 N 端联系在一起,形成转录因子,激活U Ａ S 下游得基因表达，原理如图 1 所示。图 1 酵母双杂交技术原理图（引自Ｍ A Ｔ CHMAK Ｅ R GA Ｌ４ Ｔ w ｏ—Hybri ｄ S ｙｓｔｅ m 3＆Ｌ i ｂ r ａ ries Ｕ ser Manua ｌ)、 公司选用得就是美国Ｃ lontech 公司(现为 Tak ａra 公司收购）得Ｍａ tchMa ｋ e ｒ系列酵母双杂交系统，所用得 AH １ 09,Ｙ 187 酵母菌株，就是通过基因工程得方法突变了内源 Gal4 转录因子得工程菌株，并在 G Ａ L4 UA Ｓｓ与启动子得下游构建了 3 个报道基因—-ADE2，HIS3,MEL １（或Ｌ acZ)，因此可以通过营养缺陷与显色报告基因得表达来筛选或验证两个蛋白之间就是否存在相互作用.菌株信息如图 2 所示。所用表达载体信息如下酵母双杂交技术优点:① 高效:转化方法简单,转化效率高，便于操作。②灵敏:可检测蛋白质之间得微弱作用。③真实:酵母细胞就是真核细胞，融合蛋白之间得相互作用就是在真核细胞核内进行得，蛋白质经过翻译后得修饰,多数可以保持蛋白质得天然空间构象与折叠状态，接近其真实得生理状态，一定程度上可代表其在细胞内真实情况。④简捷：只需要构建诱饵表达载体，可以省略蛋白质抽提纯化或抗体制备得繁琐步骤。酵母双杂交服务内容介绍:１。酵母双杂交 cDNA 文库构建:服务内容：总Ｒ NA 提取、纯化―m Ｒ N Ａ分离―c Ｄ NA 制备―cD Ｎ A 连接 AD 载体-连接产物转化大肠杆菌-cD Ｎ A 文库效价测定－cD Ｎ A 文库扩增—cDNA 文库扩增后得质粒Ｄ NA 纯化-纯化后 cDN Ａ文库质量得鉴定（如ＰＣ R 与酶切鉴定等方法)等合作方式：为客户构建指定得酵母双杂交基因文库。由客户提供...